牡丹授粉受精基因PoMYBs的VIGS体系的建立

• 作者: 王鹏摇 刘鹏 耿丹丹 王奎玲 郝青
• 来源期刊: 青岛农业大学学报（自然科学版）
• 关键词: 牡丹 受精 VIGS体系 PoMYB
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 199-204,217
• 页数: 7页
• 分类号: S682.29
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.ISSN.1674-148X.2021.03.006

摘要

授粉受精成败是影响牡丹结实和远缘杂交的关键生殖过程,但缺乏稳定的遗传转化体系严重影响了其基因功能验证.针对牡丹授粉受精基因功能鉴定,采用注射法分析了不同注射部位(雌蕊和花柄)和菌液浓度(1.0、1.5和2.0)对目的基因沉默效率的影响.结果表明,注射雌蕊、花柄PoMYB2基因沉默效率分别为62.5％、66.7％,注射法尤其是注射花柄的方法适用于牡丹植株病毒诱导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)体系的构建;当菌液浓度OD600分别为1.0、1.5、2.0时,PoMYB2基因的沉默效率分别为100％、77.8％和0％,菌液OD600为1.0时沉默效率最高;注射花柄上部,菌液OD600为1.0时,PoMYB1和PoMYB2基因的表达量显著降低.由此获得了沉默PsMYBs的适宜体系:以PoMYBs基因的非保守区域为靶片段,以带花柄的紧实花蕾为材料,注射花柄上部,菌液OD600为1.0,置于去离子水中,暗培养1 d,转移至正常光照培养环境后可进行检测.本研究建立的VIGS沉默体系可有效沉默雌蕊中的内源基因,为进行牡丹雌雄蕊发育、授粉受精和结实方面的基因功能验证奠定了基础.