采用重叠PCR构建高灵敏度酵母细胞传感器评估遗传毒性化合物

• 作者: 何颖 夏星雅 魏嘉利 郑枫
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 关键词: 重叠PCR 酵母细胞传感器 RNR2启动子 遗传毒性
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 论文|Original Articles
• 页码范围: 236-244
• 页数: 9页
• 分类号: R917
• 语种: 中文
• DOI: 10.11665/j.issn.1000-5048.20210213

摘要

采用重叠PCR(overlap PCR)方法构建了 pdr5与snq2基因敲除组件,研究了 pdr5、snq2基因突变对酵母细胞传感器评估遗传毒性的影响.考察了野生型、pdr5单基因突变、ssnq2单基因突变与pdr5、snq2双基因突变酵母细胞传感器暴露于系列浓度甲磺酸甲酯(MMS)、甲磺酸乙酯(EMS)、顺铂、4-硝基喹啉-N-氧化物(4NOQ)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、羟基脲、水杨酸和葡萄糖溶液24 h后的细胞生长抑制情况与16 h后的荧光诱导情况.研究结果表明,overlap PCR方法能够高效率构建基因突变酵母细胞传感器;snq2单基因突变与pdr5、snq2双基因突变细胞传感器检测遗传毒性的准确度为100％,高于野生型与pdr5单基因突变细胞传感器(87.5％);pdr5、snq2双基因突变酵母细胞传感器表现出最高的遗传毒性检测灵敏度,为构建高准确度与灵敏度的酵母细胞传感器提供了思路与方法,为酵母细胞膜转运蛋白基因pdr5与snq2的进一步功能研究奠定了基础.