蛆虫分泌排泄物对糖尿病足溃疡患者中性粒细胞抗铜绿假单胞菌作用的影响

• 作者: 李菲菲 张洁 高春辰 王天元 支黎明 王晶 王爱萍
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 糖尿病足 足溃疡 假单胞菌，铜绿 蛆虫分泌排泄物 中性粒细胞
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 论著·慢性创面修复
• 页码范围: 413-419
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20210312-00085

摘要

目的:探讨医用蛆虫分泌排泄物（ES）对糖尿病足溃疡（DFU）患者中性粒细胞吞噬及杀菌作用的影响。方法:采用实验研究的方法。选择东部战区空军医院内分泌科，糖尿病足中心2020年6—12月收治的符合入选标准的30例DFU患者［男16例、女14例，年龄（64±7）岁］。Percoll非连续性密度梯度离心法分离中性粒细胞，将每例患者细胞分别纳入生理盐水组、蛆虫ES组（每组30孔），分别加入无菌生理盐水和终质量浓度357 μg/mL（下同）蛆虫ES。培养1、2 h，行瑞氏染色观察并计算细胞吞噬率和吞噬指数。选择10例患者，将每例患者细胞分别纳入铜绿假单胞菌+中性粒细胞组、铜绿假单胞菌+中性粒细胞+蛆虫ES组（每组10孔），分别进行相应处理；另设置单纯铜绿假单胞菌组、铜绿假单胞菌+蛆虫ES组（每组10孔），分别加入铜绿假单胞菌+RPMI 1640培养液+无菌生理盐水、铜绿假单胞菌+RPMI 1640培养液+蛆虫ES。培养2 h，平板菌落计数法计数活菌菌落。分别选择6、6、3例患者，同前将每例患者细胞分别纳入蛆虫ES组和生理盐水组（每组6、6、3孔）并行相应处理。培养6 h，采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、溶菌酶mRNA表达，采用酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中IL-1β、IL-6含量，采用免疫荧光法观察溶菌酶表达阳性细胞情况。对数据行单因素方差分析、配对样本 t检验、LSD检验及Wilcoxon符号秩和检验。 结果:培养1 h，蛆虫ES组细胞吞噬率、吞噬指数［53.5%（49.7%，58.0%）、3.18（2.96，3.32）］分别与生理盐水组［52.0%（47.5%，55.2%）、3.15（2.96，3.25）］相近（ Z=-1.701、-1.092， P>0.05）；培养2 h，蛆虫ES组患者细胞吞噬率、吞噬指数［70.0%（66.7%，72.0%）、4.47（4.22，4.96）］分别明显高于生理盐水组［58.0%（55.0%，60.0%）、4.11（3.52，4.24）， Z=-4.786、-4.279， P<0.01］。培养2 h，铜绿假单胞菌+中性粒细胞组活菌菌落数明显低于单纯铜绿假单胞菌组（ P<0.01），铜绿假单胞菌+中性粒细胞+蛆虫ES组活菌菌落数明显低于铜绿假单胞菌+蛆虫ES组和铜绿假单胞菌+中性粒细胞组（ P<0.01）。培养6 h，蛆虫ES组细胞IL-1β、IL-6、溶菌酶mRNA表达均较生理盐水组明显上调（ t=-3.279、-4.273、-4.763， P<0.05或 P<0.01），蛆虫ES组细胞培养上清液中IL-1β、IL-6含量分别明显高于生理盐水组（ t=-9.526、-6.447， P<0.01），蛆虫ES组溶菌酶阳性细胞明显多于生理盐水组。 结论:蛆虫ES可通过促进DFU患者中性粒细胞免疫防御相关因子和溶菌酶的产生，从而增强中性粒细胞对铜绿假单胞菌的吞噬、杀菌作用。