茄子SmWRKY65基因克隆及其对青枯病的抗性分析

• 作者: 刘开 余炳伟 李丹丹 陈娜 曹必好
• 来源期刊: 广东农业科学
• 关键词: 茄子 青枯病 WRKY转录因子 实时荧光定量PCR VIGS
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 园艺林学|Horticulture & Forestry
• 页码范围: 42-52
• 页数: 11页
• 分类号: S641.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16768/j.issn.1004-874X.2021.03.006

摘要

[目的]通过克隆SmWRKY65(Solanum melongena L.WRKY65)基因并分析其生物信息学与功能,以期探究SmWRKY65对茄子青枯病的响应情况.[方法]以茄子抗病植株(E-31)为试验材料、叶片cDNA为模板,通过PCR技术获得SmWRKY65基因,并利用ExPASy ProtParam tool对其进行生物信息学分析.运用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)的方法对其不同组织部位与抗病、感病材料(E-32)中的响应情况进行分析;通过双酶切法构建亚细胞定位载体;运用病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术构建pTRV2-SmWRKY65载体并侵染茄子抗病植株.[结果]在茄子中成功克隆了SmWRKY65基因,该基因开放阅读框为834个核苷酸序列,编码277个氨基酸残基,在71～131区域具有1个含60个氨基酸的WRKY保守域,定位于细胞核中.时空表达分析发现,SmWRKY65在茄子根组织中的表达量最高,叶中次之,茎中最低;qRT-PCR分析表明,SmWRKY65在茄子抗病和感病材料中均响应青枯病菌的诱导上调表达;VIGS结果表明,与清水和pTRV2空载对照相比,接种青枯病菌后,pTRV2-SmWRKY65沉默植株的叶片表现出明显的萎蔫症状,结合qRT-PCR分析发现,pTRV2-SmWRKY65表达量较对照组明显下降.[结论]SmWRKY65在茄子抗病材料中的表达水平明显高于感病材料,且pTRV2-SmWRKY65植株与对照相比表现为易感症状,说明SmWRKY65沉默后茄子抗青枯病的能力下降,表明SmWRKY65可能涉及茄子青枯病抗性相关过程的调控.