骨髓源性生长因子对高糖诱导H9c2细胞焦亡的改善作用

• 作者: 张玉 王艳 赵然尊 仇治梅 龙仙萍 李朝富 陈文明 石蓓
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 关键词: 骨髓源性生长因子 H9c2细胞 细胞焦亡 NLRP3 糖尿病性心肌病
• 年，卷（期）: 2021,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学|Basic Medicine
• 页码范围: 923-929
• 页数: 7页
• 分类号: R542.2|R587.2|R977.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16016/j.1000-5404.202011210

摘要

目的 探讨骨髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,Mydgf)是否通过调控NLRP3改善高糖诱导的心肌细胞焦亡.方法 培养大鼠心肌细胞株H9c2,实验分为4组:①正常组(normal,Nor)为正常培养的H9c2细胞;②高糖组(high glucose,HG)予以50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h;③Mydgf组采用25 ng/mL重组Mydgf蛋白处理细胞12 h,随后以50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h;④Necrosulfonamide组(NSA)采用32 μmol/L NSA处理细胞0.5h,然后予50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h.Western blot法检测H9c2细胞中天冬氨酸蛋白水解酶剪切体-1(cleaved Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ACS)、炎症复合体(NLRP3)及成孔蛋白gasdermin D(GSDMD)的表达水平.ELISA法检测细胞培养液中IL-1β和IL-18的分泌量.CCK-8法检测Mydgf及NLRP3对H9c2细胞活力的影响.将携带NLRP3的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)慢病毒载体(NLRP3-EGFP)及空病毒载体(EGFP)分别转染至H9c2细胞,做回复实验,检测焦亡相关指标变化.结果 Western blot结果显示,HG组焦亡相关蛋白cleaved Caspase-1、ACS、NLRP3、GSDMD表达量较正常组明显增高(P＜0.05),Mydgf处理后,焦亡相关蛋白的表达受到明显抑制(P＜0.05),但抑制效率低于NSA组(P＜0.05).ELISA检测结果表明炎症相关指标IL-1β和IL-18在HG组中表达增高(P＜0.05),而在Mydgf组中表达下降(P＜0.05),NSA组明显下降(P＜0.05).CCK-8法检测结果表明＜25 ng/mL的Mydgf对H9c2细胞活力无明显影响,＞25 ng/mL的Mydgf明显降低H9c2细胞活力(P＜0.05).与对照组相比,过表达NLRP3使HG条件下的细胞活力明显下降.EGFP慢病毒转染NLRP3至H9c2细胞中,RT-qPCR及Western blot结果发现EGFP组中NLRP3的mRNA及蛋白表达与正常组差异无统计学意义(P＞0.05),而NLRP3-EGFP组中NLRP3的mRNA及蛋白表达均显著增高(P＜0.05).回复实验的Western blot结果显示,在高糖环境中,与Mydgf组相比,Mydgf+ NLRP 3-E GFP组中焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1表达显著增加(P＜0.05);ELISA检测结果也表明IL-1β和IL-18表达较Mydgf组明显增高(P＜0.05).结论 Mydgf可能通过抑制NLRP3来改善高糖诱导的心肌细胞焦亡.