先天性肾盂输尿管连接部梗阻上皮屏障缺陷表型及其分子机制研究

• 作者: 马羽捷 李璐 刘嘉林 陈力 刘颖 汤梁峰 毕允力
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 先天畸形 肾盂输尿管连接部梗阻 尿路上皮 屏障 缺氧
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 454-460
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn421158-20201230-00779

摘要

目的:通过检测先天性肾盂输尿管连接部梗阻(ureteropelvic junction obstruction, UPJO)患儿梗阻段组织上皮屏障结构分子、缺氧诱导因子和血管内皮标志分子的分布和表达情况，了解UPJO梗阻段上皮屏障缺陷和缺氧表型，探讨尿路上皮细胞屏障缺陷和缺氧的相关性。方法:收集2019年1～8月复旦大学附属儿科医院手术切除的UPJO患儿梗阻段17例作为UPJO组，另收集2019年5月至2020年1月因肾肿瘤行肾全切患儿的正常输尿管5例作为正常对照组。利用免疫荧光染色观察石蜡切片UPK3A、E-cadherin、ZO-1、HIF-1α以及CD34的表达与分布情况。利用氯化钴(cobalt chloride，CoCl 2)建立尿路上皮细胞系SV-HUC-1的缺氧模型，并用CCK-8法筛选最佳建模CoCl 2浓度。采用实时荧光定量RT-qPCR和蛋白质印迹法检测E-cadherin、ZO-1在mRNA和蛋白水平的表达情况，使用Stata 13.0对比分析组间差异，并用GraphPad Prism 7.0绘图。 结果:UPJO组梗阻段UPK3A、E-cadherin、ZO-1蛋白的相对表达量分别为0.338(0.154，0.585)、0.739±0.155和0.146±0.130，与对照组0.898(0.779，0.925)、1.000±0.050和1.000±0.404比较均显著减少，差异有统计学意义( P＝0.020 8、0.001 5和<0.000 1)。UPJO梗阻段HIF-1α和CD34蛋白的相对表达量分别为5.473(2.896，15.969)和3.021±0.949，较对照组1.256(0.615，1.299)和1.000±0.752明显增加，组间比较差异亦均有统计学意义( P＝0.000 9和0.000 4)。蛋白质印迹法和CCK-8实验显示，诱导SV-HUC-1细胞缺氧模型的最适CoCl 2浓度为200 μmol/L(24 h)，对细胞活力无显著影响。缺氧组SV-HUC-1细胞的ZO-1和E-cadherin的相对表达量在mRNA水平分别为0.452±0.083和0.693±0.100，与空白对照组1.029±0.291和1.000±0.045比较均显著下降，差异均有统计学意义( P＝0.008 9和0.008 2)。缺氧组SV-HUC-1细胞的相对表达量在ZO-1和E-cadherin蛋白水平分别为0.572±0.241和0.942±0.022，与空白对照组1.000±0.253和1.000±0.026比较，差异亦有统计学意义( P＝0.025 3和0.041 1)。 结论:UPJO患儿梗阻段存在上皮屏障缺损，同时也存在缺氧。在细胞水平，缺氧会使SV-HUC-1细胞间连接分子表达减少，缺氧可能是引起上皮屏障破坏的原因之一。