褪黑素对坏死性小肠结肠炎新生大鼠NLRP3及相关炎性因子影响的研究

• 作者: 赵铭 姜红 秦苗 孙梦雅 张璐璐 姜健 刘燕
• 来源期刊: 中华新生儿科杂志
• 关键词: 褪黑素 小肠结肠炎，坏死性 大鼠 核苷酸结合寡聚化结构域样受体3
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 53-58
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2096-2932.2021.02.010

摘要

目的:探讨褪黑素对坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocolitis，NEC）新生大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（nucleotide-binding oligomerization domain like receptor protein 3，NLRP3）及相关炎性因子的影响。方法:36只新生SD大鼠随机分为对照组、NEC组及褪黑素组，每组12只。对照组与母鼠同笼，自由摄食，每日腹腔注射含磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline，PBS）（360 μl/kg）及1%无水乙醇的生理盐水10 ml/kg。NEC组采用配方奶喂养+缺氧+冷刺激的方法诱导NEC，每日腹腔注射PBS（360 μl/kg）及脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）（30 mg/kg）；褪黑素组采用同样方法诱导NEC发生，每日腹腔注射褪黑素15 mg/kg及LPS 30 mg/kg。所有大鼠生后第7天处死，取回盲部肠组织进行病理学评分、TUNEL染色观察细胞凋亡、电镜观察细胞内超微结构，并用酶联免疫吸附法检测白细胞介素（interleukin，IL）18、IL-1β、IL-6 水平，Western-blot法检测NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1（cysteine aspartic acid specific protease-1，caspase-1）蛋白表达水平。结果:（1）HE染色显示NEC组大鼠肠壁绒毛损伤程度较重，大部分绒毛中部、根部断裂，部分隐窝无法识别、可见透壁坏死。褪黑素组肠壁绒毛损伤情况较NEC组轻。（2）对照组、NEC组及褪黑素组大鼠肠组织细胞凋亡数目分别为（13.6±1.1）、（95.0±9.2）、（37.2±6.5）个，NEC组高于对照组和褪黑素组（ P<0.05），褪黑素组与对照组差异无统计学意义（ P>0.05）。（3）电镜下显示NEC组线粒体肿胀，脊结构排列紊乱，并出现部分脆性裂解现象；褪黑素组线粒体损伤情况较NEC组轻。（4）NEC组IL-18、IL-1β、IL-6表达水平最高，分别为（2.13±0.22）、（0.89±0.06）、（0.45±0.02） pg/ml；其次为褪黑素组，分别为（0.76±0.05）、（0.32±0.03）、（0.23±0.02） pg/ml；最低为对照组，分别为（0.55±0.08）、（0.27±0.04）、（0.17±0.03） pg/ml，NEC组高于对照组和褪黑素组（ P<0.05），褪黑素组与对照组差异无统计学意义（ P>0.05）。（5）NEC组NLRP3及caspase-1蛋白表达水平最高，分别为0.92±0.14、1.13±0.12，其次为褪黑素组，分别为0.46±0.09、0.63±0.08，最低为对照组，分别为0.31±0.06、0.59±0.05，NEC组高于对照组和褪黑素组（ P<0.05），褪黑素组与对照组差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:褪黑素可抑制NLRP3及IL-18、IL-1β、IL-6、caspase-1等相关炎性因子的表达，减轻新生大鼠NEC病变的严重程度。