PCR结合斑点杂交技术检测禽多瘤病毒方法的建立及应用

• 作者: 张富友 于晓慧 蒋文明 孙淑红 赵鹏 刘华雷 李阳
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 鹦鹉幼雏病 禽多瘤病毒 地高辛标记核酸探针 核酸斑点杂交 全基因组 遗传进化
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 92-98
• 页数: 7页
• 分类号: S851.34
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2021.03.019

摘要

鹦鹉幼雏病是由禽类多瘤病毒(APV)引起的多种鹦鹉雏鸟死亡的急性病毒性传染病,严重危害鹦鹉养殖业的健康发展.为提高分子生物学方法检测APV的敏感性和特异性,对APV基因片段进行克隆和序列分析,设计合成1对特异性引物,以VP1基因为模板,经PCR扩增获得731 bp的核苷酸DNA,并用DIG标记,制备用于检测APV的特异性核酸探针;对制备的探针进行灵敏度检测,同时与普通PCR进行敏感性比较;使用制备的探针,对经分离鉴定和制备保存的其他7种禽病毒核酸进行特异性检测;用该核酸探针,对疑似感染APV的鹦鹉病料进行斑点杂交检测,并对鉴定为阳性的APV进行全基因组扩增和序列分析.结果显示:该探针可检测到2 pg量的APV特异性核酸片段;仅APV-VP1阳性核酸显色,呈现阳性反应,而阴性核酸和其他7种禽病毒核酸均不显色,呈阴性反应.结果表明:建立的核酸斑点杂交检测方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于临床初步诊断.本方法的建立为我国开展APV分子流行病学调查及其感染的临床诊断提供了技术支撑.