RNaseH-1抑制端粒酶阴性骨肉瘤并增强放射敏感性

• 作者: 余笑言 王晴晴 王渊 周云峰
• 来源期刊: 中华放射肿瘤学杂志
• 关键词: RNaseH-1基因 骨肉瘤细胞系 端粒的替代延长 放射敏感性
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 物理·技术·生物
• 页码范围: 625-630
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn113030-20210114-00022

摘要

目的:研究核酸内切酶RNaseH-1对使用端粒的替代延长(ALT)机制来延长端粒的骨肉瘤细胞放射敏感性影响及机制。方法:通过慢病毒转染构建过表达RNaseH-1的ALT骨肉瘤细胞U2OS和端粒酶阳性骨肉瘤细胞143B。对转染后的细胞使用CCK8法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期。克隆形成实验检测放射敏感性，免疫荧光实验检测细胞DNA损伤(γ-H 2AX灶点)情况，蛋白印迹法实验检测相关蛋白表达水平。 结果:过表达RNaseH-1后U2OS细胞的增殖能力显著降低，且细胞周期阻滞于G 1期(均 P<0.05)。U2OS细胞中RNaseH-1的过表达使ATM和Chk2的磷酸化水平显著升高、同源重组相关蛋白RAD51和BRCA1的表达显著降低，并导致细胞中DNA损伤水平显著上升、细胞放射敏感性增强(均 P<0.05)。而过表达RNaseH-1不对端粒酶阳性的143B细胞产生抑制效应( P>0.05)。 结论:过表达RNaseH-1抑制了端粒酶阴性骨肉瘤细胞并增强了放射敏感性，其机制可能是RNaseH-1在ALT细胞中抑制同源重组修复并激活ATM信号通路。