竹节参总皂苷通过调控自噬改善非酒精性脂肪性肝炎的实验研究

• 作者: 罗悦 刘朝奇 贺海波 王婷 何毓敏 张长城 袁丁 袁成福
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 关键词: 非酒精性脂肪性肝炎 竹节参总皂苷 miR-199a-5p/ATG5 自噬
• 年，卷（期）: 2021,（9）
• 所属期刊栏目: 药理
• 页码范围: 2260-2266
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20210201.401

摘要

应用高糖高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH),研究竹节参总皂苷(total sa-ponins of Panax japonicus)的干预作用,并探寻其可能作用机制.使用高糖高脂饲料喂养小鼠建立NASH模型,给予不同剂量竹节参总皂苷(15,45 mg·kg-1)进行干预,共饲养26周.HE染色法观察肝脏组织形态及病理变化.qRT-PCR法测定小鼠肝脏中miR-199a-5p、自噬相关基因5(autophagy related gene 5,ATG5)及炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的转录表达水平.Western blot法检测小鼠肝脏中自噬相关蛋白ATG5,P62/SQSTM1 (P62),微管相关蛋白1轻链3b(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)-I和Ⅱ蛋白的表达情况.免疫荧光染色法检测P62蛋白的表达情况.为验证miR-199a-5p与ATG5的靶向调节关系,采用miR mimic/inhib-itor NC,miR-199a-5p mimic/inhibitor转染Hepa 1-6细胞,检测ATG5 mRNA及蛋白的表达;构建pMIR-reportor ATG5-3'UTR荧光素酶报告基因质粒,将该质粒与miR mimic/inhibitor NC,miR-199a-5p mimic/inhibitor共同转染Hepa 1-6细胞,检测荧光素酶活性.体内实验中模型组HE染色表现典型脂肪样变及炎性浸润,miR-199a-5p表达上升而ATG5 mRNA及蛋白表达均下降.自噬相关蛋白P62表达水平明显上升、LC3Ⅱ/I比值下降、炎症因子转录表达水平显著上升.竹节参总皂苷干预后,肝组织病理学表现显著改善,miR-199a-5p表达下降、ATG5 mRNA及蛋白表达升高.自噬相关蛋白P62表达水平显著下降、LC3Ⅱ/I比值上升、炎症因子(IL-6,IL-1β,TNF-α)转录表达水平显著下降.体外实验发现,miR-199a-5p过表达细胞中ATG5 mRNA及蛋白表达水平显著下降,荧光素酶活性显著降低;而抑制miR-199a-5p表达后ATG5mRNA及蛋白表达水平上升,荧光素酶活性增强.研究结果表明,竹节参总皂苷可改善高糖高脂饮食小鼠NASH,其作用机制可能与调节miR-199a-5p/ATG5信号通路,调节自噬水平,改善NASH的炎症反应有关.