沉默UBE2T基因表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响

• 作者: 陈鸿运 李晓明 黄国胜 杨金华 乔飞
• 来源期刊: 中国呼吸与危重监护杂志
• 关键词: 非小细胞肺癌 泛素结合酶E2T 增殖 侵袭 迁移
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 其他|Other
• 页码范围: 577-583
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1671-6205.202011058

摘要

目的 探讨沉默泛素结合酶E2T(UBE2T)基因表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等生物学行为的影响.方法 体外培养A549细胞,分别构建三组shRNA-UBE2T质粒载体(UBE2T-shRNA1组、UBE2T-shRNA2组和UBE2T-shRNA3组)以及shRNA-NC(shRNA-NC组),并以脂质体转染法转染A549细胞,以转染空载体的细胞作为对照组.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染效率;使用克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验、划痕实验检测沉默UBE2T表达对A549细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移等生物学行为的影响;使用蛋白印迹(Westernblot)检测A549细胞增殖、凋亡相关蛋白表达及PI3K/AKT信号通路蛋白表达.结果 转染后,UBE2T-shRNA1组、UBE2T-shRNA2组和UBE2T-shRNA三组UBE2T mRNA表达水平明显下调(均P＜0.05),且以UBE2T-shRNA3组下调最多(P＜0.05).与对照组及shRNA-NC组比较,UBE2T-shRNA3组克隆形成率、A549细胞侵袭数、划痕愈合率,Ki67蛋白表达、PCNA蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著降低(均P＜0.05),A549细胞凋亡率及Bax/Bcl-2、Cleaved caspase-3/Caspase-3比值显著增加(均P＜0.05).对照组与shRNA-NC组上述各指标比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 shRNA干扰UBE2T构建稳定低表达UBE2T的A549细胞模型可靠,UBE2T表达下调可以促进A549细胞凋亡,并抑制其增殖、侵袭和转移能力.其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路激活相关.