鉴别家兔多杀性巴氏杆菌与支气管败血波氏菌的双重TaqMan qPCR方法的建立

• 作者: 程序 仇汝龙 范志宇 胡波 陈萌萌 宋艳华 薛家宾 朱伟峰 钱莺娟 王芳
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 多杀性巴氏杆菌 支气管败血波氏菌 双重TaqMan qPCR
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 671-677
• 页数: 7页
• 分类号: S852.61
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0104

摘要

为提高家兔呼吸道疫病主要细菌性病原检测的可靠性和标准化,根据GenBank中多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)Kmt基因与支气管败血波氏菌(Bordetella bronchiseptica)Fla基因分别设计特异性引物和探针,对反应条件进行优化,建立兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏菌双重TaqMan qPCR方法,并初步用于检测家兔肺脏及鼻拭子临床样本.结果显示,该方法建立的标准曲线在标准品浓度为2.35X106～2.35 copies/μL时有良好的线性关系;与绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、沙门菌、产气荚膜梭菌无交叉反应;最低检测限均为2.35 copies/μL;批内、批间重复性检验变异系数均小于2％.检测70份临床样本DNA结果显示,多杀性巴氏杆菌阳性率为50.0％,支气管败血波氏菌阳性率为42.9％,混合感染率为21.4％,该方法与细菌分离培养和常规PCR符合率分别为80.0％、92.0％.以上数据表明,本研究建立的双重TaqMan qPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,无需病原菌的培养即可用于临床样品的快速检测,为兔多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏菌的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、高效、准确的检测方法.