黄梁木维管组织细胞激光显微切割技术体系建立

• 作者: 王雪 龙健梅 董甜甜 郑丹菁 张立定 彭昌操
• 来源期刊: 广西植物
• 关键词: 黄梁木 激光显微切割(LMD) 石蜡切片 维管组织 RNA完整性
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 生理与育种|Physiology and Breeding
• 页码范围: 1226-1236
• 页数: 11页
• 分类号: Q944.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.11931/guihaia.gxzw201910039

摘要

黄梁木是华南地区重要的速生用材树种,其快速的次生生长主要取决于包括形成层细胞在内的维管组织细胞的发育进程.为了精准获取维管组织形成层细胞与高质量RNA,该研究以黄梁木幼苗为材料,通过石蜡切片与激光显微切割(LMD)结合的方法,成功获得形成层、木质部和韧皮部细胞.结果表明:优化石蜡切片流程,以卡诺/丙酮作为固定剂(丙酮浓度10％～50％),100％正丁醇作为脱水剂和透明剂,之后经过梯度渗蜡、包埋、切片、脱蜡后可获得形态完整的组织切片且保证了组织细胞RNA的完整性.调试LMD参数,放大倍数为10×～20×;激光能量为42～44;切割孔径为4～13;切割速度为16～25;最终获得的这3种细胞的RNA完整性(RIN)均大于5.0,即形成层细胞RIN=5.0,韧皮部细胞RIN=6.6和木质部细胞RIN=7.9,满足后续RNA-seq分析.该研究通过优化石蜡切片和LMD参数,成功建立了黄梁木幼苗茎段维管组织细胞的激光显微切割技术体系,为进一步揭示林木树种维管组织分裂与分化的调控机制奠定基础.