PRV和CAstV-Ⅰ及CIAV纳米PCR检测方法与常规PCR检测方法敏感度的比较

• 作者: 张民秀 谢芝勋 邓显文 张艳芳 罗思思 谢丽基 谢志勤 刘加波 范晴 曾婷婷 黄娇玲 王盛
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 纳米PCR 常规PCR 敏感性 退火温度
• 年，卷（期）: 2021,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1376-1384
• 页数: 9页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0153

摘要

为了比较PRV、CAstV-Ⅰ和CIAV的单重纳米PCR方法和单重PCR方法的敏感性,探讨靶基因GC含量和引物Tm值对纳米PCR和常规PCR的影响,本研究根据PRV的gE基因、CIAV的VP1基因和CAstV-Ⅰ的ORF1b基因设计了12对引物,运用这12对引物建立单重的纳米PCR方法和常规PCR方法,分别优化纳米PCR和常规PCR方法的退火温度和引物浓度,比较两者的敏感性.结果 显示,纳米PCR和常规PCR方法在最佳的反应条件下的敏感度基本一致,纳米PCR方法在敏感度上没有明显的优势;纳米PCR反应液对高GC含量靶基因的扩增比常规的PCR反应液更容易;纳米PCR的可选退火温度范围宽松,而常规PCR则需要严格的退火温度才能增强扩增效果或减少非特异性扩增;常规PCR的退火温度只与靶基因的GC含量呈现正显著相关(P＜0.01),纳米PCR的退火温度与靶基因的GC含量和引物Tm值无相关性.以上数据为相关的技术人员对于病原体检测技术的选择上提供了数据参考.