牛樟芝免疫调节蛋白的过量表达及活性分析

• 作者: 李彩彩 朱聪 杨国栋 吴剑锋 王晶晶 乔悦 付牧然 崔宣宣 董冰雪
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 牛樟芝免疫调节蛋白 密码子偏好性 原核表达 响应面分析 免疫调节
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告|RESEARCH ARTICLES
• 页码范围: 2397-2412
• 页数: 16页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20200560

摘要

[目的]用大肠杆菌高效表达牛樟芝免疫调节蛋白(Antrodia camphorata immunomodulatory protein,ACA).[方法]借助DNAworks3.2.4设计引物合成大肠杆菌密码子偏好性的ACA基因,构建于pET-32a和pGEX-4t-2,转化大肠杆菌,测序后分别命名为pET-32a-ACA/BL21和pGEX-4t-2-ACA/BL21;探索密码子偏好性、载体、培养基种类和诱导条件对ACA表达的影响并使用响应面法优化蛋白表达.纯化重组ACA (recombinant ACA,rACA)并干预小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过测定rACA对巨噬细胞增殖能力、吞噬能力、细胞形态及产NO、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNFα)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)等细胞因子能力的影响来评估rACA的活性.[结果]pET-32a-ACA/BL21更适合ACA表达;在优化的SOB(酵母粉8.92 g/L)中培养pET-32a-ACA/BL21,添加0.42 mmol/L IPTG 25℃诱导7h时rACA以可溶性表达为主,产量达187.122μtg/mL,是目前大肠杆菌表达真菌免疫调节蛋白的最高报道.纯化的rACA能显著促进小鼠巨噬细胞增殖、提高细胞的吞噬活性和改变细胞形态,显著诱导巨噬细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β.[结论]rACA的高效可溶性表达及类似天然ACA的活性使它可以替代天然ACA作为制药行业的食品添加剂或者免疫调节剂,甚至可以用于药物研究.