脐带间充质干细胞外泌体携载miR-4465抑制食管癌细胞的侵袭及迁移

• 作者: 孙峰 谢玮
• 来源期刊: 医学研究生学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人脐带间充质干细胞 外泌体 食管癌细胞 miR-4465 迁移 侵袭
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究|Basic Research
• 页码范围: 1252-1258
• 页数: 7页
• 分类号: R735.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16571/j.cnki.1008-8199.2021.12.004

摘要

目的 间质干细胞分泌的外泌体(MSC-ex)是MSC旁分泌的活性成分,在多种疾病包括肿瘤的治疗中有着重要的应用.文章拟探讨人脐带间充质干细胞(MSC)外泌体携载miR-4465抑制食管癌细胞EC109侵袭、迁移的作用及机制.方法 分离、培养脐带MSCs并提取MSC-ex,透射电镜、纳米颗粒分析观察外泌体的结构,Western blot检测外泌体标志蛋白CD9和CD81表达.超声法将miRNA mimics NC及miR-4465 mimics导入MSC-ex,获得miRNA mimics NC修饰MSC-ex(NC miR-ex)及 miR-4465 mimics 修饰 MSC-ex(miR-4465-ex).PBS、MSC-ex、miR-4465-ex 分别与EC109共培养,采用激光共聚焦显微镜观察MSC-ex在细胞内分布,qRT-PCR检测EC109的miR-4465水平,Transwell和划痕实验观察miR-4465 mimics转染及miR-4465-ex作用后EC109的迁移及侵袭能力,免疫印迹法检测EC109的上皮-间质化相关蛋白的表达.结果 与NC miR-ex 组(1.00±0.09)比较,miR-4465-ex 25 nmol/L、miR-4465-ex50nmol/L 组EC109细胞中miR-4465表达水平(20.26±2.75、34.71±5.26)显著升高(P＜0.01),且具有剂量依赖性.与mimics NC组(84.67±4.60)相比,miR-4465 mimics25 nmol/L(23.67±4.14)转染组EC109细胞的迁移率明显降低(P＜0.01),且miR-4465 mimics50nM(10.27±1.32)转染组EC109细胞的迁移率更加明显(P＜0.01).与 NC miR-ex 组(82.35±4.52)比较,miR-4465-ex 组(23.12±2.22)EC109细胞的迁移率明显降低(P＜0.01),Western blot结果表明,与PBS和NC miR-ex组相比,miR-4465-ex作用后EC109细胞 N-Cadherin(P＜0.05)、p-Smad1/2(P＜0.01)和 Vim-entin(P＜0.01)表达下调,E-Cadherin表达上调(P＜0.01).结论 MSC-ex作为载体携载高水平miR-4465,可能通过下调TGFB/Smad1/2通路抑制食管癌细胞EC109的侵袭、迁移.