注射剂科氏葡萄球菌污染的鉴定和同源性分析方法研究

• 作者: 孙雪奇 肖剑 秦力 陈婕 柴海毅 刘程智 杨小蓉 毛新武
• 来源期刊: 药物分析杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微生物污染 鉴定 同源性分析 葡萄球菌 傅里叶变换红外光谱(FTIR) 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 16S rRNA基因序列分析 核糖体分型 全基因组测序(WGS) 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 微生物污染溯源流程
• 年，卷（期）: 2021,（10）
• 所属期刊栏目: 安全监测|Safety Monitoring
• 页码范围: 1764-1774
• 页数: 11页
• 分类号: R917
• 语种: 中文
• DOI: 10.16155/j.0254-1793.2021.10.14

摘要

目的:采用多种常用微生物鉴定方法和同源性分析方法,对某制药企业注射剂无菌检查试验中分离的微生物污染菌A1进行来源分析,为药品生产企业完善微生物监控体系,实现生产和检验过程的微生物控制提供技术参考.方法:使用VITEK 2微生物生化鉴定仪对A1和本次污染调查采集的78株菌进行初步鉴定,选择与A1同属的菌,分别采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、16S rRNA基因序列分析、核糖体分型(Ribotyping)、全基因组测序(WGS)等方法进行鉴定和同源性分析,同源性分析结果用PFGE进行了验证.结果:除MALDI-TOF MS法的部分鉴定结果外,几种方法的微生物鉴定结果完全相同;上述方法的同源性分析结果均为A1溯源自无菌检验使用的无菌隔离器内部仪器表面采集菌株A2(16S rRNA基因序列分析本次仅溯源至亚种),该结果得到了PFGE证实;不同方法在种的集群之间的亲缘关系划分有所不同.结论:微生物污染溯源的流程一般包括以下3步:首先采用生化鉴定法初步确定污染菌的种;其次从污染调查采集菌株和环境菌库中选择与污染菌同种的微生物;然后,使用16S rRNA基因序列分析、核糖体分型、全基因组测序等方法进行微生物鉴定和同源性分析.采用16S rRNA基因序列分析时,必须进行多相鉴定以便准确溯源,才能有效实施纠正与预防措施.