miR-221通过靶向CDKN1B调节脓毒症血管内皮细胞细胞凋亡和炎症反应

• 作者: 马海军 李肃 仲盛年
• 来源期刊: 现代医学
• 学科: 医学
• 关键词: miR-221 CDKN1B 炎症反应 血管内皮细胞 脓毒症
• 年，卷（期）: 2021,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1063-1069
• 页数: 7页
• 分类号: R459.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7562.2021.09.013

摘要

目的:探讨微小RNA-221(miR-221)对内毒素(LPS)诱导的脓毒症血管内皮细胞损伤的影响及机制.方法:使用100 ng· ml-1的LPS诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)构建脓毒症血管内皮细胞损伤模型,通过脂质体转染技术将miR-221 inhibitors转染至LPS诱导的HUVECs,实验分为对照(Con)组、模型(IPS)组、转染对照(LPS+ anti-miR-NC)组和转染(LPS+ anti-miR-221)组.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中miR-221和CDKN1B的表达情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关的X(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的表达水平,生物信息学软件TargetScan预测miR-221的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-221和CDKN1B之间的靶向作用关系.同时抑制miR-221和CDKN1B的表达,采用同样的方法检测细胞凋亡和炎症因子表达情况.结果:与Con组相比,LPS组miR-221、Bax和Cleaved Caspase-3的表达明显升高,CDKN1B和Bcl-2的表达明显降低,炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量明显增多,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与LPS组和LPS+anti-miR-NC组相比,LPS+ anti-miR-221组细胞凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3的表达水平均明显降低,Bcl-2的相对表达水平明显升高,而炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验证实了miR-221和CDKN1B存在靶向结合关系.结论:抑制miR-221能够逆转LPS对HUVECs损伤的影响;抑制CDKN1B可逆转抑制miR-221对LPS诱导的HUVECs损伤保护作用;miR-221可通过靶向CDKN1B调控脓毒症血管内皮细胞凋亡和的炎症反应.