泛素连接酶Cul7调控人滋养层细胞Notch1蛋白稳定性

• 作者: 焦寒 徐阳 范冰凌 林欣欣 付杰军
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 关键词: Notch1 Cullin 7 泛素化 胎盘发育
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 41-46
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2021.08.011

摘要

目的 探讨泛素连接酶Cullin 7(Cul7)在人胎盘绒毛外滋养层细胞HTR8/SVneo中对Notch1蛋白稳定性的影响,初步阐明Cul7对Notch1蛋白表达的调控作用.方法 Western blot法检测Cul7基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中Notch1蛋白表达的变化.慢病毒稳定转染构建Cul7低表达HTR8/SVneo细胞系,通过real-time PCR检测Notch1 mRNA的表达.Western blot法检测干扰或过表达Cul7后Notch1蛋白的表达.应用蛋白免疫共沉淀(Co-IP)确定Cul7与Notch1蛋白结合情况.结果 与野生型MEF细胞比较,Cul7基因敲除MEF细胞Notch1蛋白表达增加.在HTR8/SVneo细胞也观察到干扰Cul7后Notch1蛋白表达显著升高,但对Notch1 mRNA的表达无显著影响.用放线菌酮(CHX)处理细胞后,与对照组比较干扰Cul7使Notch1蛋白降解的半衰期延长.将Flag-Notch1重组质粒和HA-Cul7真核表达质粒导入HTR8/SVneo细胞后,Co-IP结果显示外源性Cul7与Notch1无结合.结论 Cul7调控Notch1降解速度,但对Notch1转录表达无显著影响.Cul7可能通过间接方式调控Notch1蛋白稳定性.