重组酶聚合酶扩增检测产志贺毒素大肠埃希菌的微流控芯片技术

• 作者: 范一灵 王淑娟 李琼琼 胡颖 宋明辉 秦峰 刘浩 杨美成
• 来源期刊: 食品科学
• 关键词: 重组酶聚合酶扩增 微流控芯片 产志贺毒素大肠埃希菌 stx基因 快速检测
• 年，卷（期）: 2021,（10）
• 所属期刊栏目: 安全检测|Safety Detection
• 页码范围: 297-304
• 页数: 8页
• 分类号: R917
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20200323-349

摘要

采用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),开发产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)的等温检测方法,结合圆盘式微流控芯片快速检测目标微生物.以stx1和stx2基因为靶点,设计和筛选适宜的RPA检测引物和探针序列,验证了19株STEC菌株(含9种stx基因亚型)和21株非STEC菌株,并采用人工污染的牛肉样品对集成化的微流控芯片进行评价.筛选出检测stx1和stx2基因的高特异性引物、探针组合,与美国农业部微生物实验室技术指南中STEC定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法相比,目标基因检测的包容性和排他性均为100％.荧光RPA微流控芯片法在20?min内可同时进行32个反应,可检测STEC菌体灵敏度为9.5×103?CFU/mL.根据GB 4789.6—2016《食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》的规定经增菌培养后在人工污染牛肉样品中可检测1?CFU/25?g的STEC污染,方法的相对正确度和相对检出水平均为100％.本研究开发了一种荧光RPA微流控芯片检测方法,可检测常见stx基因亚型STEC菌株,操作简单、反应速度快,适用于STEC的高通量快速检测.