微小RNA-497负调控Wnt3a基因靶点抑制胶质瘤细胞增殖

• 作者: 卢凤飞 张红波 张世忠 张锦
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 胶质瘤 微小RNA-497 Wnt3a 增殖
• 年，卷（期）: 2021,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1963-1966
• 页数: 4页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20210107-01008

摘要

目的:探讨微小RNA(miR)-497在胶质瘤细胞中表达及调控Wnt3a基因靶点抑制胶质瘤细胞增殖的影响。方法:病毒载体质粒pLVTHM、元件质粒PsPAXZ和pMDZ.G 3个质粒共同组成慢病毒包装系统。重组质粒pGL3-WNT3a-wt 3’端非编码区(3’UTR)/pGL3-WNT3a-mut 3’UTR与miR-497共转染胶质瘤细胞株U251，检测处理组与对照组荧光素酶活性的变化，验证Wnt3a是miR-497作用靶点。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测胶质瘤细胞株U251转染miR-497后Wnt3a基因在mRNA和蛋白表达。荧光定量PCR检测胶质瘤细胞株U251感染病毒LV-miR-497后表达变化。噻唑蓝(MTT)检测胶质瘤细胞株U251感染病毒LV-miR-497和/或瞬时转染Wnt3a质粒后细胞生长曲线。结果:荧光素酶实验验证miR-497与Wnt3a的3’UTR野生型结合位点(WT)，与突变型Wnt3a质粒转染的U251细胞比较，野生型质粒转染细胞的荧光素酶活性显著降低。miR-497在mRNA和蛋白水平抑制Wnt3a的表达，miR-497与Wnt3a呈负相关，两组有差异统计学意义(0.95±0.23、0.31±0.09， P<0.05)。慢病毒载体转染miR-497建立稳定细胞株，与对照组比较，LV-miR-497转染后miR-497高表达，差异有统计学意义(0.86±0.14、8.51±1.32， P<0.05)。MTT检测胶质瘤细胞转染miR-497后增殖，结果提示过表达miR-497能够抑制胶质瘤细胞的生长，3组差异有统计学意义(0.78±0.41、0.54±0.22、0.60±0.09， P<0.05)。LV-miR-497处理的U251细胞比用LV-ctrl处理的细胞形成更小和更少的集落，3组差异有统计学意义(0.67±0.35、0.61±0.14、0.59±0.11， P<0.05)。 结论:miR-497直接作用Wnt3a基因靶点，高表达miR-497抑制肿瘤细胞增殖。