miR-30a-5p调控USP22对MPP+诱导的SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 姜永宁
• 来源期刊: 河北医药
• 关键词: 帕金森 miR-30a-5p USP22 细胞增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2021,（16）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2405-2410
• 页数: 6页
• 分类号: R742
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-7386.2021.16.001

摘要

目的 探讨miR-30a-5p对1甲基4苯基吡啶(MPP+)诱导的人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 体外培养SK-N-SH细胞,分为对照组(NC组)、MPP+组(1 mmol/L MPP+作用细胞24 h)、MPP++miR-30a-5p组(1 mmol/L MPP+作用转染miR-30a-5p模拟物的细胞24 h)、MPP++miR NC组(1 mmol/L MPP+作用转染模拟物阴性对照序列的细胞24 h)、MPP++siUSP22组(1 mmol/L MPP+作用转染USP22小干扰RNA的细胞24 h)、MPP++si-NC组(1 mmol/L MPP+作用转染乱序无意义阴性序列的细胞24 h)、MPP++miR-30a-5p+pcDNA USP22组(1 mmol/L MPP+作用共转染miR-30a-5p模拟物与USP22过表达载体的细胞24 h)和MPP++miR-30a-5p+pcDNA NC组(1 mmol/L MPP+作用共转染miR-30a-5p模拟物与空载体的细胞24 h),实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测各组细胞中miR-30a-5p和USP22 mRNA表达水平,蛋白印迹(Western Blot)法检测各组细胞中USP22蛋白表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK8)检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测组各组细胞凋亡率,Western Blot检测各组细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和活化的半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与USP22靶向调控关系.结果 与NC组比较,MPP+组细胞中miR30a 5p表达水平显著降低(P<0.05),USP22的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率和CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05).与MPP++miRNC组比较,MPP++miR-30a-5p组细胞存活率和CyclinD1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05).与MPP++siNC组比较,MPP++siUSP22组细胞存活率和CyclinD1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05).与MPP++miR-30a-5p+pcDNA NC组比较,MPP++miR 30a5p+pcDNA USP22组细胞存活率和CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05).miR-30a-5p在SK-N-SH细胞中靶向负调控USP22表达.结论 上调miR-30a-5p表达可促进MPP+诱导的SK-N-SH细胞增殖,并抑制细胞凋亡,其作用机制与下调细胞中USP22表达有关.