土荆芥种子总黄酮提取物通过诱导细胞凋亡、自噬和周期阻滞抑制人肝癌SMCC-7721细胞增殖

• 作者: 聂锦涛 钱瑞华 黄婧 郝俊玫 马宁 王亚男
• 来源期刊: 现代预防医学
• 关键词: 土荆芥 黄酮 肝癌细胞 转录组学 凋亡 自噬 周期阻滞
• 年，卷（期）: 2021,（15）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用|Experimental Technology and Applications
• 页码范围: 2808-2814
• 页数: 7页
• 分类号: R151.1
• 语种: 中文

摘要

目的 探究土荆芥种子总黄酮提取物对肝癌细胞增殖的抑制作用及机制.方法 采用AO/EB染色法观察细胞的凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;电镜观察细胞的亚显微结构;利用高通量测序技术分析细胞转录组的变化,Western blotting检测自噬和凋亡相关蛋白;线粒体膜电位探针试剂盒检测线粒体膜电位的的变化;活性氧(ROS)测定试剂盒检测活性氧的水平.结果 土荆芥种子总黄酮提取物以剂量依赖性方式抑制SMCC-7721细胞的增殖(t=44.014,P＜0.05),并使细胞周期停滞在G2期(t=77.071,P＜0.01).电子显微镜观察到细胞核膜皱缩,出现核碎裂,核内染色质聚集,线粒体肿胀、嵴断裂,细胞内出现许多自噬体和自噬溶酶体.转录组测序后,进行DEG富集分析,显示细胞凋亡相关基因Caspases-3、Caspases-4表达水平上调,Caspases-9的表达水平下调,细胞周期蛋白P21、CDK、Cyclin明显上调(P＜0.01);GO分析主要富集在自噬反应生物学过程;KEGG分析主要富集在自噬、凋亡、细胞衰老和铁死亡信号通路.Western blotting结果表明SMMC-7721细胞中随着土荆芥种子总黄酮浓度的上升凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9和Bad蛋白的表达均上调,Bcl-2蛋白表达下调均具有统计学差异(t=7.624,P＜0.01;t=32.071,P＜0.01;t=9.383,P＜0.01;t=11.832,P＜0.01);自噬相关蛋白AMPK、Beclin-1蛋白的表达上调,LC3-I向LC3-II的转化量也逐渐增加,而mTOR蛋白的表达下调(t=9.280,P＜0.01;=4.577,P＜0.05;t=17.007,P＜0.01;t=7.96,P＜0.01).细胞内线粒体膜电位降低(t=20.585,P＜0.05).ROS含量上升(F=14.925,P＜0.01).结论 土荆芥种子总黄酮提取物通过诱导细胞凋亡、自噬和周期阻滞抑制人肝癌SMCC-7721细胞增殖.