微炎症环境中肠上皮细胞与巨噬细胞共培养后MAPK、NF-κB通路改变及意义

• 作者: 陈玉娇 晏杰
• 来源期刊: 山东医药
• 关键词: 肠上皮细胞 巨噬细胞 Transwell共培养 免疫耐受 MAPK通路 NF-κB通路
• 年，卷（期）: 2021,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: R574.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2021.23.005

摘要

目的 观察微炎症环境中肠上皮细胞与巨噬细胞共培养后MAPK、NF-κB通路改变,探究固有免疫系统维持肠道免疫平衡的细胞间交流机制.方法 将人结肠腺癌上皮细胞株Caco2、HCA7分别与人白血病单核巨噬细胞株THP1构建Transwell小室共培养体系,加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)5 ng/mL刺激不同时间后,采用Western blotting法检测三种细胞单独及共培养后的MAPK通路[磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)]及NF-κB通路[磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、磷酸化核蛋白(p-p65)]相关蛋白表达.将对数生长期的THP1细胞分为Caco2培养基组和DMEM培养基组,离心后分别重悬于Caco2条件培养基和DMEM完全培养基,加入TNF-α5 ng/mL刺激不同时间后,采用Western blotting法检测细胞p-ERK、p-p38、p-IκBα、p-p65蛋白表达,采用RT-PCR法检测细胞TNF-α相关细胞因子[白细胞介素(IL)-8、IL-6、IL-1β]和CC亚族趋化性细胞因子2(CCL2)、CCL3 mRNA表达.结果 在单独培养的细胞中,Caco2细胞在TNF-α刺激30 min后p-ERK、p-p38、p-p65表达均升高,THP1细胞在TNF-α刺激90 min后p-p38、p-IκBα、p-p65表达均升高(P均<0.05);与单独培养细胞TNF-α刺激相同时间比较,共培养后的Caco2细胞在TNF-α刺激90 min后p-ERK、p-p38、p-IκBα表达均降低(P均<0.05),共培养后的THP1细胞在TNF-α刺激90 min后p-ERK、p-p38、p-IκBα、p-p65表达均降低(P均<0.05).在单独培养的细胞中,HCA7细胞在TNF-α刺激120 min后p-ERK、p-p38、p-IκBα、p-p65表达均升高,THP1细胞在TNF-α刺激30、120 min后p-ERK、p-p38、p-p65表达均升高(P均<0.05);与单独培养细胞TNF-α刺激相同时间比较,共培养后的HCA7细胞在TNF-α刺激120 min后p-ERK、p-IκBα、p-p65表达均降低,共培养后的THP1细胞在TNF-α刺激30、120 min后p-ERK、p-p38、p-p65表达均降低(P均<0.05).与DMEM培养基组TNF-α刺激相同时间比较,Caco2培养基组TNF-α刺激120 min后p-ERK、p-p38、p-IκBα、p-p65表达均降低,TNF-α刺激60 min后IL-8、IL-1β、CCL2 mRNA相对表达量均降低(P均<0.05);两组TNF-α刺激相同时间后的IL-6、CCL3 mRNA相对表达量比较均无明显差异(P均>0.05).结论 微炎症环境中肠上皮细胞Caco2、HCA7和巨噬细胞THP1共培养后各细胞MAPK和NF-κB通路激活及促炎因子分泌均被抑制,这种细胞间的信号交流是通过分泌可溶性介质介导的.