水包油佐剂对小鼠骨髓来源树突状细胞蛋白表达的影响

• 作者: 年悬悬 施金荣 龚铮 刘京 李军英 张家友 杨晓明
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓 树突状细胞 水包油佐剂 蛋白组学 信号通路
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-14
• 页数: 7页
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2022.01.002

摘要

目的 探索未成熟的小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow derived dendritic cells,BMDCs)的分离诱导培养方法,并研究水包油佐剂对BMDCs蛋白表达的影响.方法 解剖小鼠获得小鼠骨髓细胞,分析在骨髓细胞诱导培养获得未成熟的BMDCs的过程中,红细胞裂解液(red blood cell lysis buffer,RBC)、诱导剂IL-4、rmGM-CSF及培养容器(6孔板或细菌培养皿)对获得未成熟BMDCs的纯度和成熟度的影响.用水包油佐剂AddaVax刺激培养收获的BMDCs 24 h后,检测BMDCs表面分子的表达差异,以及通过蛋白组学方法检测BMDCs细胞所有蛋白的表达差异.结果 一只小鼠的骨髓细胞诱导培养6 d,培养条件为无RBC处理、细菌培养皿培养,获得的BMDCs细胞数最高,为1.2×107/只,且BMDCs细胞的纯度较高(约60％),与在6孔板中IL-2和rmGM-CSF共同诱导获得的BMDCs纯度差异无统计学意义(P＞0.05).各种培养方法诱导BMDCs表面成熟标志CD86、CD40的表达分别＜40％、＜70％.水包油佐剂AddaVax诱导BMDCs表面分子MHC Ⅱ、CD40、CD80和CD86的表达均＞80％.蛋白组学分析显示,AddaVax 促进了 BMDCs 生物调节以及免疫应答相关蛋白 NRF2、KEAP1、P16、P53、Rb、BGFR、Ras、Raf、TRADD、ARIDIA、BAF155、ARID2、SWI/SNF的表达.结论 分离的骨髓细胞不需要进行RBC处理,在细菌培养皿用rmGM-CSF 诱导培养骨髓细胞6 d即可制备大量未成熟的BMDCs.水包油佐剂AddaVax促进了未成熟BMDCs的增殖、分化、成熟,并且促进了 BMDCs免疫相关通路蛋白的表达.