微小RNA-7调节脑源性神经营养因子/α-突触核蛋白轴对帕金森病细胞模型细胞凋亡的影响

• 作者: 李云 单艳华 刘永萍 赵鹏
• 来源期刊: 临床神经病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微小RNA-7 脑源性神经营养因子 α-突触核蛋白 帕金森病 凋亡
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 论著|Articles
• 页码范围: 92-98
• 页数: 7页
• 分类号: R742.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1648.2022.02.004

摘要

目的 探讨微小RNA(miR)-7调节脑源性神经营养因子(BDNF)/α-突触核蛋白(α-syn)轴对帕金森病(PD)细胞模型细胞凋亡的影响.方法 采用6-羟多巴胺注射法构建PD大鼠模型并体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y,用1-甲基4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导细胞从而建立PD细胞模型.qRT-PCR检测PD大鼠模型左侧黑质组织及PD细胞模型中miR-7、BDNF和α-syn mRNA表达水平.对SH-SY5Y细胞进行转染并分为对照组、MPP+组、MPP++miR-NC组、MPP++miR-7 mimics组、MPP++si-NC组、MPP++si-BDNF组、miR-NC组、miR-7 mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-7组、MPP++miR-7 mimics+pcDNA组和MPP++miR-7 mimics+pc-BDNF组.流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测BDNF、α-syn、线粒体融合蛋白(Mfn2)、核呼吸因子1(NRF1)、微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved caspase)-3表达;双荧光素酶报告实验验证miR-7与BDNF的靶向关系.结果 与对照组相比,模型组大鼠脑黑质组织中miR-7、α-syn mRNA水平明显减少,BDNF mR-NA明显增加(均P<0.05).与对照组相比,MPP+组细胞凋亡率及LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05),miR-7与α-syn、Bcl-2、Mfn、NRF1蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05).双荧光素酶报告实验结果显示,miR-7直接负调控BDNF表达(P<0.05).过表达miR-7或BDNF沉默表达后,模型细胞凋亡率及BDNF、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平显著下降,Bcl-2、Mfn、NRF1蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);抑制miR-7表达后,细胞凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平明显降低(均P<0.05).BDNF过表达逆转了miR-7过表达对PD细胞模型细胞凋亡率、凋亡相关蛋白及线粒体自噬相关蛋白的抑制作用(均P<0.05).结论 miR-7过表达能够通过靶向下调BDNF表达,进而抑制α-syn表达,降低PD细胞模型的细胞凋亡.