芦丁对人结肠癌SW480细胞凋亡的促进作用及其作用机制

• 作者: 陈素贤 谷泽慧 马炀斐 谭琦 李琪 王亚帝
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 芦丁 DAPT 结肠肿瘤 细胞凋亡 丝裂原活化蛋白激酶 Notch-1
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究|Research in basic medicine
• 页码范围: 356-363
• 页数: 8页
• 分类号: R735.35
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587X.20220212

摘要

目的:探讨芦丁对人结肠癌(CRC)SW480细胞凋亡的影响,阐明芦丁在CRC治疗中的作用及其可能的分子机制.方法:毒性与基因比较数据库(CTD)和GeneCards数据库预测与芦丁相关的交集mRNA,基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库预测交集mRNA的生物学功能及作用通路,采用String数据库寻找与Notch-1相关作用蛋白;以人CRC SW480细胞作为研究对象,分别给予0.1、1.0和10.0μmol·L-1γ-分泌酶抑制剂DAPT初步筛选,进而给予1、2、4、8和10μmol·L-1 DAPT干预,筛选出芦丁与DAPT的最适给药浓度.实验分为空白对照组、芦丁组(22μmol·L-1)、DAPT组(1μmol·L-1)和芦丁+DAPT组(22μmol·L-1芦丁+1μmol·L-1 DAPT);MTT法检测SW480细胞增殖活性,Hoechst33258核染色观察各组细胞凋亡形态,流式细胞术检测各组SW480细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中Notch-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中,Notch-1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(caspase-9)、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平.结果:CTD和GeneCards数据库共有芦丁的34个交集mRNA;GO和KEGG数据库预测出交集mRNA与CRC细胞凋亡过程相关;String数据库中与Notch-1相关蛋白16个[相互作用分数(score)>0.42];芦丁与DAPT的最适给药浓度分别为22μmol·L-1和1μmol·L-1.与空白对照组比较,芦丁组、DAPT组和芦丁+DAPT组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中Notch-1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),细胞中caspase-3、caspase-9和Bax蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05).芦丁组与DAPT组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05).与芦丁组和DAPT组比较,芦丁+DAPT组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),caspase-3、caspase-9和Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05).结论:生物信息学分析及实验研究结果均表明芦丁能促进CRC细胞凋亡,这一作用可能是通过靶向调控Notch-1调节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路来实现的.