水稻OsNRAMP5基因低镉积累突变位点功能标记的开发与验证

• 作者: 于江辉 李焱瑶 秦冠男 翁绿水 蒋显斌 邓力华
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻 低镉 分子标记 分子育种 OsNRAMP5基因
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·生理生化|CROP GENETICS AND BREEDING·PHYSIOLOGY AND BIOCHEMISTRY
• 页码范围: 289-295
• 页数: 7页
• 分类号: S511.035.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2022.02.001

摘要

为了对水稻低镉积累基因进行精准检测和世代跟踪,提高低镉积累水稻品种的分子标记辅助育种(MAS)选育效率,基于籼稻品种9311及其低镉积累突变体lcd1材料7号染色体上OsNRAMP5基因第7外显子单核苷酸的突变,参照四引物扩增受阻突变PCR(Tetra-primer amplification refractory mutation system-PCR,Tetra-primer ARMS-PCR)原理设计了共显性功能标记nra5fun,且采用PCR方法分别对18份籼稻、18份粳稻及金23B/lcd1杂交F1代材料进行分子标记特异性验证.电泳结果表明,含OsNRAMP5基因SNP突变材料lcd1可扩增出大小为723 bp、210 bp的条带,含野生型OsNRAMP5基因的材料9311可扩增出大小为723 bp、557 bp的条带,金23B/lcd1 F1代杂合型材料可扩增出大小为723 bp、557 bp、210 bp的条带,共显性标记nra5fun得到的电泳条带与引物设计时预测的目标片段完全吻合;Sanger测序结果表明,电泳扩增条带片段的序列与目的基因的DNA序列和SNP突变位点的序列一致;18份籼稻和18份粳稻种质资源均能扩出大小为723 bp、557 bp 2个目的条带,说明这些材料均不含有OsNRAMP5基因的单个SNP突变,表明该标记特异性较高.因此,开发的功能标记nra5fun能够准确、高效地识别水稻低镉积累基因的纯合突变型、纯合野生型和杂合型,可在水稻低镉积累分子育种中推广应用.