UDG在两种水生动物病毒核酸片段检测中的抗污染效果研究

• 作者: 陈凡 丁能水 李奕雅 汪小东 许弟群
• 来源期刊: 闽南师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: PCR UDG 抗污染 水生动物病毒 核酸片段 检测
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 页码范围: 84-92
• 页数: 9页
• 分类号: Q783
• 语种: 中文

摘要

尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)作为生物体内的DNA修复酶系,能有效水解单链或双链DNA上的尿嘧啶,可用于PCR过程中残留污染物的清除.本研究以PCR预混液试剂盒作为检测工具,以鲤浮肿病和罗非鱼湖病的阳性核酸片段检测为例,探讨了巢式和荧光定量PCR检测时,UDG的抗污染效果.研究结果表明:(1)向PCR反应体系中添加200μmol/L的dUTP,可保证扩增产物中有足够的尿嘧啶掺入,且对扩增效率影响较小.(2)使用0.2 U/10μL的UDG浓度,可清除常规PCR中99.9％以上(多数大于99.95％)的阳性污染物,或清除荧光定量PCR(探针法)中96.5％以上的阳性污染物.继续增加UDG用量,则污染物清除效率的提高有限.本研究为特定条件下UDG对污染性模板的清除效果做了定量统计,能为该技术的具体应用与进一步优化提供实验依据.