基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法建立与应用

• 作者: 王微 张霞 张人俊 胡安东 杨颖 温贵兰 文明
• 来源期刊: 山地农业生物学报
• 学科: 农学
• 关键词: H6亚型禽流感 H6蛋白 间接ELISA方法 建立 应用
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 21-27
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2022.01.003

摘要

为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优化,建立检测禽流感病毒H6抗体的间接ELISA方法并对临床鸡血清样本检测评价.结果表明:该方法最佳反应条件是,包被抗原浓度为10μg/mL,4℃过夜;5％脱脂奶粉37℃封闭2 h;血清稀释度为1:20,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1:5000,37℃作用30 min;显色时间为37℃10 min.该ELISA方法可特异性检测H6亚型禽流感抗体,阳性血清稀释至1:320仍可检出,与其他禽病阳性血清均无交叉反应,检测变异系数均小于10％.以该ELISA方法检测2017年至2019年收集的1837份家禽临床血清样本,H6亚型禽流感抗体阳性率为10.45％.这些结果表明,建立的基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性、重复性和可靠性,能为H6亚型禽流感血清流行病学调查提供技术手段.