人肾上腺组织单细胞悬液制备方法的研究

• 作者: 郭冰倩 王逸夫 郭雅婕 叶雨 黄燕 陈虹霏 蒋永华 莫曾南
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肾上腺组织 单细胞悬液 酶消化法 差异表达基因 流式细胞术
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 164-171
• 页数: 8页
• 分类号: R361
• 语种: 中文
• DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2022.01.027

摘要

目的:探讨人肾上腺组织单细胞悬液制备的最佳消化方法.方法:收集来自广西医科大学第二附属医院手术终止妊娠的16～18孕周胎儿肾上腺组织3例,分别使用3种消化方案(A方案:HBSS溶液中加入1 mg/mL Ⅰ型胶原酶,0.1mg/mLDN-ase Ⅰ;B方案.:HBSS溶液中加入1 mg/mLⅡ型胶原酶,0.1 mg/mL DNase Ⅰ;C方案:HBSS溶液中加入1m～mLⅣ型胶原酶,0.1 mg/mLDNase Ⅰ)进行消化.采用显微镜计数得到单细胞总数和细胞存活率;通过mRNA测序获得不同消化方案的差异基因表达并对其功能进行分析;使用实时荧光定量PCR检测不同消化方案得到的细胞的标志基因相对表达量;使用流式细胞术检测CYP17A1+类固醇细胞和CHGA+嗜铬细胞的比例.结果:使用A方案和B方案消化得到的单细胞悬液结团少、形态完整、边界清楚、杂质及细胞碎片较少、背景较干净,而使用C方案得到的单细胞悬液有少量结团;使用B方案和C方案消化得到的细胞存活率差异均无统计学意义(均P＞0.05);类固醇细胞标志基因CYP11A1,CYP17A1,CYP11B1,类固醇调控基因SF-1,MC2R和成熟的嗜铬细胞标志基因CHGA的表达水平均在使用B方案消化时较高.结论:使用B方案消化是较优选的单细胞悬液制备方法.