p53凋亡刺激蛋白2基因肝脏条件性敲除小鼠的构建和鉴定

• 作者: 寇卜心 柴梦音 豆双双 庞丽君 陈德喜 刘晓霓
• 来源期刊: 实用肝脏病杂志
• 关键词: Cre-LoxP系统 p53凋亡刺激蛋白2 条件性敲除 小鼠
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 实验性肝炎|Hepatitis in vitro and in mice
• 页码范围: 170-174
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5069.2022.02.005

摘要

目的 采用Cre-LoxP系统构建p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)基因肝脏条件性敲除小鼠.方法 利用自行设计的sgRNA序列,在ASPP2基因两端插入LoxP序列,构建ASPP2-flox小鼠.采用PCR法和测序法对F0代和F1代小鼠进行基因型鉴定.将ASPP2-flox F1小鼠与特异性表达Alb-Cre的工具鼠交配,获得肝脏敲除ASPP2基因小鼠.采用PCR法进行基因型鉴定.采用Westernblot和免疫组化法检测ASPP2基因肝脏敲除小鼠肝脏ASPP2蛋白表达.结果 对F0代和F1代动物基因行PCR和测序结果表明,构建ASPP2-flox小鼠成功;F1代杂合子的基因型为ASPP2 fl-;将F1代杂合子与Alb-Cre小鼠进行杂交后,回交ASPP2 fl/-小鼠,其基因型为ASPP2fl/fl CreT,即为ASPP2肝脏条件性敲除小鼠;经Western blot和免疫组化法检测显示ASPP2fl/fl CreT小鼠肝脏ASPP2蛋白表达显著减少.结论 基于Cre-LoxP系统成功构建ASPP2基因肝脏条件性敲除小鼠,为后续实验作了良好的基础.