miR-199a-5p 通过靶向 JunB 介导心力衰竭大鼠 心肌细胞凋亡的作用机制

• 作者: 郑茜 张勇 杨东伟 王东伟 郑州大学附属郑州中心医院
• 来源期刊: 中西医结合心脑血管病杂志
• 关键词: 心力衰竭 miR-199a-5p 转录因子活化蛋白激酶B 靶向 心肌细胞凋亡 大鼠 实验研究
• 年，卷（期）: 2023,（4）
• 页码范围: 60-66
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

目的:观察miR-199a-5p对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法:将120只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、Antagomir对照组、Antagomir组、Agomir对照组及Agomir组。除假手术组(18只)外，其余组大鼠采用持续14 d结扎左冠状动脉前降支诱导构建心肌梗死后心力衰竭大鼠模型，成功诱导94只心力衰竭大鼠，剔除4只，随机分组，每组大鼠18只。分别给予Antagomir对照组、Antagomir组、Agomir对照组及Agomir组大鼠心肌内注射2×1010 PFU/mL miR-199a-5p Antagomir对照液、Antagomir液、Agomir对照液及Agomir稀释液各100μL,假手术组与模型组大鼠均等量注射生理盐水。2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法检测心肌梗死面积；苏木精-伊红(HE)染色法检测心肌组织病理损伤情况；末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色法检测心脏缺血部位细胞凋亡水平；实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组大鼠心肌组织中miR-199a-5p、转录因子活化蛋白激酶B(JunB)基因相对表达水平；双荧光素酶试验验证miR-199a-5p与JunB的靶向关系；免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠心肌组织内活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-Caspase 3)、JunB、淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果:与假手术组比较，模型组大鼠心肌梗死面积增加，组织结构不完整，心肌细胞排列错乱不规则，炎性细胞浸润，细胞间有明显凋亡，miR-199a-5p基因及Cleaved-Caspase 3、Bax蛋白表达水平升高，JunB mRNA及JunB、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较，Antagomir对照组及Agomir对照组大鼠心肌病理组织学变化、相关基因和蛋白相对表达水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。Antagomir组大鼠心肌组织病理情况显著改善，miR-199a-5p基因及Cleaved-Caspase 3、Bax蛋白表达水平降低，JunB mRNA及JunB、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);Agomir组大鼠心肌组织病理损伤加重，miR-199a-5p基因及Cleaved-Caspase 3、Bax蛋白表达水平升高，JunB mRNA及JunB、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。JunB为miR-199a-5p的靶基因。结论:miR-199a-5p可诱导心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡，可能与靶向抑制JunB表达有关。