铜绿假单胞菌信号分子3-O-C12-HSL与PPARγ-LBD的结合特性研究

• 作者: 张云燕 马刘合一 陈敏怡 李有强 刘润梅 罗冬元
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 铜绿假单胞菌 PPARγ 分子对接模拟 表面等离子体共振技术 N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯 配体结合区域
• 年，卷（期）: 2023,（7）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 673-677
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20212782

摘要

目的 制备纯化的人过氧化物酶体增殖物激活受体-配体结合域（PPARγ-LBD）肽段并观察铜绿假单胞菌信号分子N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯（3-O-C12-HSL）与PPARγ-LBD的结合强度。方法 采用分子对接的方式预测3-O-C12-HSL与PPARγ的结合位点。合成PPARγ-LBD基因序列并插入pET28b质粒，鉴定后通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达重组肽段，进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及Western blot分析。表面等离子体共振技术检测3-O-C12-HSL与PPARγ-LBD的结合动力学参数。结果 分子对接结果显示3-O-C12-HSL与PPARγ-LBD区的Tyr473和Tyr327形成氢键，3-O-C12-HSL末端柔性碳链与PPARγ-LBD区的Met329、Leu330等残基形成疏水结合。制备获得人PPARγ-LBD肽段，经SDS-PAGE及Western blot检测在25~35 ku有一条蛋白的印迹，与PPARγ-LBD分子质量一致。3-O-C12-HSL与PPARγ结合的亲和力常数为1.65×10-4 mol/L，结合速率常数为1.06×102/ms，解离速率常数为1.75×10-2/s。结论 3-O-C12-HSL与PPARγ-LBD功能区结合能力强于PPARγ特异性拮抗剂GW9662，为制备针对3-O-C12-HSL的特异性靶向药物提供了实验依据。