Mtb感染Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体通过miR-145对巨噬细胞极化的影响

• 作者: 李建军 吴素方 白丰玺
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 结核分枝杆菌 巨噬细胞，肺泡 肺泡上皮细胞 外泌体 基因表达调控 Ⅱ型肺泡上皮细胞 microRNA-145
• 年，卷（期）: 2023,（7）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 678-685
• 页数: 7页
• 分类号: R521
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20220154

摘要

目的 探讨结核分枝杆菌（Mtb）感染Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）来源外泌体（Exos）对巨噬细胞极化的影响。方法 实验1：体外培养AECⅡ和Mtb毒株H37Rv，用Mtb感染AECⅡ并分离Exos，分为AECⅡ组和Mtb-AECⅡ组；透射电子显微镜（TEM）和纳米粒子追踪分析（NTA）观察Exos形态，检测Exos的数量和大小；流式细胞术鉴定Exos表面特征标志物CD63、CD81和HSP70表达；BCA法检测Exos的蛋白质含量；miRNA微阵列检测2组间差异miRNA表达谱并进行验证；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6和IL-10水平。实验2：将AECⅡ分为对照组、mimic-NC组、miR-145 mimic组、inhibitor-NC组、miR-145 inhibitor组，用过表达或沉默miR-145的慢病毒转染AECⅡ后用Mtb感染并分离Exos，实时荧光定量PCR（qPCR）检测转染后Mtb-AECⅡ Exos中miR-145水平；流式细胞术检测巨噬细胞M1型标志物（CD86）、M2型标志物（CD163）表达；qPCR检测巨噬细胞中miR-145、TNF-α、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1（Arg-1）和IL-10的mRNA水平。结果 实验1：Mtb感染的AECⅡ分泌Exos为球形囊泡，直径约为100 nm；Exos中CD63、CD81、HSP70均呈阳性；与AECⅡ组相比，Mtb-AECⅡ组中Exos的数量和蛋白质含量、miR-145、IL-10水平增加（P＜0.05），TNF-α和IL-6水平降低（P＜0.05）。实验2：与对照组相比，miR-145 mimic组Mtb-AECⅡ Exos中miR-145水平、CD163阳性巨噬细胞百分比及巨噬细胞中miR-145、Arg-1和IL-10 mRNA水平升高（P＜0.05），CD86阳性巨噬细胞百分比、巨噬细胞中TNF-α mRNA、iNOS mRNA水平降低（P＜0.05），miR-145 inhibitor组上述指标的变化与miR-145 mimic组相反。结论 Mtb感染AECⅡ来源Exos可能通过miR-145刺激巨噬细胞向M2型极化并抑制M1型极化，对抗炎症。