微血管内皮细胞来源的外泌体对血管性痴呆模型 小鼠脑血管形成及神经损伤的作用研究

• 作者: 林东晓 陈贞君 李华 黄星华
• 来源期刊: 中西医结合心脑血管病杂志
• 关键词: 血管性痴呆 微血管内皮细胞 外泌体 血管形成 神经保护 实验研究
• 年，卷（期）: 2024,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学论著/研究
• 页码范围: 65-71
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

目的:探究微血管内皮细胞来源的外泌体对血管性痴呆(VD)模型小鼠脑血管形及神经损伤修复的影响。方法:采用超高速离心法提取小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3的外泌体，透射电子显微镜(TEM)观察外泌体形态，纳米颗粒追踪分析(NTA)测定外泌体径粒分布情况，蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定外泌体标志蛋白CD63、TSG101、Alix表达；将40只小鼠按照随机数字表法分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、外泌体(b-Exo)组、阳性对照(DP)组，每组10只，除假手术组，其余3组小鼠均采用双侧颈总动脉缩窄法构建VD模型，b-Exo组腹腔注射100μL的b-Exo(100μg/mL),DP组腹腔注射盐酸多奈哌齐(1 mg/kg),假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水，每日1次，持续28 d; Morris水迷宫行为学实验分析小鼠学习记忆能力，苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠海马组织病理学变化，免疫荧光染色检测小鼠脑组织血管形成情况，Western Blot检测小鼠海马组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平，免疫荧光染色检测小鼠海马组织中神经元特异核蛋白(NeuN)表达，酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清脑损伤相关因子星形胶质源性蛋白(S-100β)与神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平。结果:从bEnd.3细胞分离的颗粒物呈圆形囊泡状，CD63、TSG101及Alix蛋白均高表达，说明该颗粒物为外泌体，记为b-Exo;与假手术组比较，模型组小鼠逃避潜伏期延长，通过目标象限次数和在目标象限停留时间百分比减少，海马CA1区神经元细胞数量减少，出现明显病理学损伤，血管形成减少，VEGF蛋白相对表达量下调，NeuN表达减少，血清S-100β与NSE水平升高，差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较，b-Exo组和DP组小鼠逃避潜伏期缩短，通过目标象限次数和在目标象限停留时间百分比增加，海马CA1区损伤明显减轻，神经元细胞数量有所增加，血管形成增加，VEGF蛋白相对表达量上调(P<0.05),NeuN表达增加，同时，血清中S-100β与NSE水平降低(P<0.05)。结论:微血管内皮细胞来源的外泌体能明显促进VD小鼠的血管形成，并修复神经损伤，对VD小鼠起到治疗作用。