miR-200a通过上调Nrf2对老年糖尿病心肌病大鼠心肌的保护作用

• 作者: 杨晓净 肖婷 曹晨 邓向群
• 来源期刊: 中西医结合心脑血管病杂志
• 关键词: 糖尿病心肌病 微小RNA-200a 核因子E2相关因子2 氧化应激 大鼠 实验研究
• 年，卷（期）: 2024,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学论著/研究
• 页码范围: 49-54
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

目的:探讨微小RNA-200a(miR-200a)对老年糖尿病大鼠心肌的保护作用及机制。方法:采用高脂饮食+链脲菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病心肌病模型，分为对照组和STZ组。通过注射携带miR-200a腺相关病毒9(AAV9)在心肌内过表达miR-200a,分为对照+AAV9-control组、对照+AAV9-miR-200a组、STZ+AAV9-control组、STZ+AAV9-miR-200a组，每组8只。体外培养大鼠心肌细胞H9c2,分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-control+si RNA组(转染AAV9-control和si RNA 48 h后用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-control+si核因子E2相关因子2(Nrf2)组(转染AAV9-control和si Nrf2 48 h后使用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-miR-200a+siRNA组(转染AAV9-miR-200a和si RNA 48 h后用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-miR-200a+si Nrf 2组(转染AAV9-miR-200a和si Nrf2 48 h后用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)。使用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量；实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-200a表达水平，蛋白免疫印迹法检测相关蛋白表达水平；2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞活性氧(ROS)水平；免疫荧光检测Nrf2表达。结果:与对照组比较，STZ组心肌组织miR-200a表达下调(P<0.05)。与对照+AAV9-control组比较，STZ+AAV9-control组心肌组织LDH、CK-MB、MDA水平升高，SOD水平、血红素氧化酶1(HO-1)、细胞核Nrf2蛋白、细胞质Nrf2蛋白表达及Nrf2荧光密度降低(P<0.05)。与STZ+AAV9-control组比较，STZ+AAV9-miR-200a组心肌组织LDH、CK-MB、MDA水平及TUNEL阳性细胞率降低，SOD水平、HO-1、细胞核Nrf2蛋白、细胞质Nrf2蛋白表达及Nrf2荧光密度升高(P<0.05)。高糖处理可降低H9c2细胞存活率，提高ROS、MDA、LDH水平(P<0.05);在此基础上转染miR-200a后上述指标被抑制；同时转染miR-200a和si Nrf2后，ROS、MDA、LDH升高，细胞存活率降低(P<0.05)。结论:miR-200a提高Nrf2表达从而减轻高糖诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡，这一效应与Nrf2核易位的促进及下游抗氧化应激信号有关。