人扁桃体B淋巴细胞mRNA的差异显示分析及活化B细胞表达的新EST的分离

• 作者: 崔莲仙 张正健 殷际义 袁勃 赵庆
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 扁桃体 B淋巴细胞 聚合酶链反应 Northern分析
• 年，卷（期）: 1999,（2）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 129-132
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.1999.02.015

摘要

目的 分离新的B细胞活化基因.方法 采用差异显示反转录PCR技术(DDRT-PCR)对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异显示情况进行分析,对显示片段进行克隆并行Northern分析,对Northern杂交阳性的cDNA片段进行测序并比较同源性.结果 差异显示分析共获得明显差异表达的cDNA片段62条,选择主要表达于活化B细胞上的20条cDNA片段克隆到pGEM-T载体上,并逐一对静止和活化B细胞RNA进行Northern分析,其中6条cDNA片段在活化B细胞中呈Northern杂交阳性且与差异显示情况相符, 对它们进行测序,然后通过国际互联网与GenBank, EMBL和DDBJ的DNA数据库比较序列同源性,发现其中4个克隆与已发现的基因具明显同源性,一个克隆是新的, 另一个克隆虽然与人T细胞分泌的趋化因子I-309同源性达95%,但二者转录本不同.结论 通过DDRT-PCR分离到两个可能为新的B细胞活化基因的cDNA片段,这为进一步克隆新的B细胞活化基因奠定了基础.