正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库构建及EST初步分析

• 作者: 孙石开 尹珊 李延生 李晓宁 李晓泉 杨坚 章民 罗廷荣 苏丽娟 蔡新斌
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 猪 外周血淋巴细胞 cDNA文库 表达序列标签(EST)
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 791-797
• 分类号: S828|Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2011.07.026

摘要

[目的]构建猪淋巴细胞基因文库,初步绘制正常猪外周血淋巴细胞的基因表达谱,为进一步筛选免疫相关基因提供平台.[方法]以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与质粒载体连接后转化大肠杆菌,进一步扩增后,获得猪外周血淋巴细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合,并进行序列分析和注释.[结果]构建了正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库,获得库容量为1.2×106 PFU/mL、重组率为93.3%、85%插入片段处于750～2000 bp的高质量文库；随机测定1100条ESTs,经拼接和聚类,获得152条高表达的基因重叠群(Contigs)和619条低表达基因——单拷贝的EST(Singletons)；经序列比对分析,发现23.3% ESTs为与任何物种都没有匹配的新基因,75.9% ESTs为与猪没有匹配的新基因.用GO数据库对获得的EST进行基因功能分类和KEGG路径图分析,发现丝裂原活化蛋白激酶途径(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)、钙信号通路、胰岛素信号通路、脂肪细胞因子信号通路、Toll-like受体信号通路、B细胞受体信号通路和T细胞受体信号通路的基因均有较高表达.[结论]大部分的猪外周血淋巴细胞基因尚未被分离和鉴定出来,但这些基因mRNA转录和表达丰度均较高,且在猪外周血淋巴细胞中起着非常重要的作用.