人干细胞因子基因5＇旁侧序列的克隆和功能研究

• 作者: 成光杰 朱定尔 聂怡玲 谭文斌 谭运年 郭小珊 陈汉春
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人干细胞因子基因 基因表达调控 报告基因分析 HeLa细胞 基质结合区 沉默子
• 年，卷（期）: 2000,（4）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 425-429
• 页数: 5页
• 分类号: Q756|Q786|Q753
• 字数: 3646字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7626.2000.04.001

摘要

人干细胞因子(human stem cell factor,hSCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用.利用改进的PCR体系,从人类基因组DNA中扩增出自hSCF基因编码起始位点(+181)至5＇旁侧-1190位点共1 372 bp的片段,将其克隆至pGEM-T载体中,经序列分析证明无误.为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域,用基因缺失技术从-162(BstX I)位点向上游分别延伸至-273(Pst Ⅰ)、-339(Sma Ⅰ)、-381(Sac Ⅰ)、-440(EcoR Ⅰ)、-570(Hinc Ⅱ)、-853(Bgl Ⅱ)及-1190(Xho Ⅰ)等位点,共获7个不同长度的hSCF基因5＇旁侧序列片段,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶(luc)报告基因栽体pGL2-Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染HeLa细胞,培养48 h后检测Luc活性.结果表明:hSCF基因5＇旁侧-1190～-853区域对luc表达有明显的增强作用,而-339～-273区域则显示有抑制作用.分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验,结果均出现一个或多个特异性滞留区带,说明这两个区域存在转录因子的结合位点.实验结果表明,hSCF基因5＇旁侧-1190～-853区域富含AT,是一典型基质结合区,而-339～-273区域为一新的沉默子,在hSCF基因表达中发挥调控作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈汉春	湖南医科大学分子生物学研究中心	8	25	3.0	4.0
2	谭文斌	湖南医科大学分子生物学研究中心	8	18	3.0	3.0
3	聂怡玲	湖南医科大学分子生物学研究中心	3	8	2.0	2.0
4	成光杰	湖南医科大学分子生物学研究中心	5	13	2.0	3.0
5	谭运年	湖南医科大学分子生物学研究中心	3	10	2.0	3.0
6	朱定尔	湖南医科大学分子生物学研究中心	3	12	2.0	3.0
7	郭小珊	湖南医科大学分子生物学研究中心	2	7	2.0	2.0