定量RT-PCR中人干细胞因子的RNA-CRS的构建

• 作者: 成光杰 朱定尔 罗赛群 聂怡玲 谭文斌 郭小珊 陈汉春
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因表达定量 定量RT-PCR 人干细胞因子基因
• 年，卷（期）: 2000,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 315-318
• 页数: 4页
• 分类号: Q7
• 字数: 1854字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2000.03.024

摘要

一种适用于定量RT-PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术,构建人干细胞因子(hSCF)基因的RNA竞争性参考标准(RNA-CRS)的新方法:用RT-PCR技术,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCF cDNA,并克隆入质粒pGEM-T获重组的pGEMSCF载体,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理,以导致hSCF cDNA中一小片段缺失,由此获得重组pGEMSCF模拟体(mimic),经体外转录得到hSCF RNA-CRS.测序表明:该RNA-CRS与hSCF mRNA比较,缺失了从第499位至608位共110个核苷酸,但二者RT-PCR反应可用同一对扩增引物,反应动力学极为相似.这种hSCF RNA-CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准,适用于定量RT-PCR中,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析.此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及/或调控的检测和研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈汉春	湖南医科大学分子生物学研究中心	8	25	3.0	4.0
2	罗赛群	湖南医科大学分子生物学研究中心	5	13	2.0	3.0
3	谭文斌	湖南医科大学分子生物学研究中心	8	18	3.0	3.0
4	聂怡玲	湖南医科大学分子生物学研究中心	3	8	2.0	2.0
5	成光杰	湖南医科大学分子生物学研究中心	5	13	2.0	3.0
6	朱定尔	湖南医科大学分子生物学研究中心	3	12	2.0	3.0
7	郭小珊	湖南医科大学分子生物学研究中心	2	7	2.0	2.0