人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化

• 作者: 周小明 姚立红 安乃莉 张智清 曾革非 钭理强 陈爱君
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮细胞生长因子 原核细胞 表达
• 年，卷（期）: 2000,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 68-71
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 2583字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2000.02.002

摘要

目的为了获得大量重组人血管内皮细胞生长因子(HumanVascularEndothelialGrowthFactor,hVEGF),以研究其在心血管和药学领域具有的潜在药用价值.方法用PCR方法扩增目的基因hVEGF165,连接到pET-3a载体上,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,建立可高效表达的pET-3a/hEVGF165重组质粒,经IPTG诱导表达,Westemblot检测表达产物的抗原性,通过MonoQ阴离子层析和FPLCSuperosel2分子筛柱层析,进行初步纯化,用MTT法检测其生物学活性.结果pET-3a/hEVGF表达产物经纯化后,其纯度可达到90%以上,表达的rhEVCF165能呈剂量依赖性地促进人静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖.结论组建了天然形式hEVGF165的大肠杆菌菌株,并摸索出一套纯化工艺,为大规模生产重组hEVGF165奠定了基础.