人U6基因POI Ⅲ启动子表达反义VEGF cDNA抑制SMMC-7721肝癌细胞VEGF表达的观察

• 作者: 汤宇澄 钱关祥 陈诗书
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 反义VEGF,U6 POI Ⅲ启动子,人肝癌细胞株
• 年，卷（期）: 2000,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 388-393
• 页数: 6页
• 分类号: Q74
• 字数: 3924字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7626.2000.03.020

摘要

由RNA聚合酶启动子在细胞内转录高浓度反义RNA是抑制靶蛋白的一种有效手段,有报道POI Ⅲ启动子转录小分子RNA存在效率不高,带有较多的非特异性序列等缺点,为了克服这些问题,表达反义VEGF RNA的人U6基因表达盒对人肝癌细胞株SMMC-7721 VEGF表达的抑制作用进行了研究.首先PCR扩增200bp VEGF cDNA以正、反向插入人U6 snRNA.通过测序证实反向插入的正确性.采用细胞原位杂交,RNA酶保护分析,Northern印迹来证实反义RNA表达的情况,利用RT-PCR方法研究了其对人肝癌细胞株SMMC-7721 VEGF表达的抑制效果.细胞原位杂交结果显示U6启动子转录产物主要分布于细胞核内,细胞浆内亦有表达,RNA酶保护分析显示U6基因POI Ⅲ启动子能高表达所需大小反义RNA,Northern印迹结果显示脂质体lipofectamine介导含U6基因POI Ⅲ启动子的质粒转染人肝癌细胞株SMMC-7721后12 h即有表达且可持续表达6 d.RT-PCR证实U6基因POI Ⅲ启动子转录的反义VEGF RNA能有效抑制SMMC-7721细胞VEGF的mRNA表达.已有的研究结果揭示POI Ⅲ启动子是反义基因治疗中一种好的选择.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈诗书		63	435	11.0	17.0
2	钱关祥		39	186	7.0	11.0
3	汤宇澄		4	23	2.0	4.0