重组人β-防御素-2基因在昆虫细胞的转染表达

• 作者: 王伯瑶 蔡绍晖 黄宁
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 年，卷（期）: 2001,（8）
• 所属期刊栏目: 中国病理生理学会炎症发热感染低温专业委员会第八届
• 页码范围: 800
• 页数: 1页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2001.08.094

摘要

目的:BEVS(Baculovirus expression vector system)杆状病毒表达系统是近年涌现的适用范围最广、表达效率最高的真核表达系统之一.本研究旨在探索应用该系统高效表达hBD-2的可行性及技术路线.方法:(1)利用引物hBD2p6和hBD2p9经PCR扩增,从原质粒的pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2中扩增出带有翻译起始密码ATG和终止密码TGA的完整重组hBD-2/His基因片段,通过双酶切,使该片段两端分别带有ScaI和KpnI两种限制性内切酶粘性末端;将此外源性片段插入转移质粒pAcGHLT-A的多克隆位点中的ScaI和KpnI位点上,使其处在多角蛋白基因强启动子的控制之下.(2)经重组pAcGHLT-A/hBD-2/His转移载体和AcNPV DNA共转染Sf21细胞,并在细胞内进行同源重组,形成重组病毒rAcNPVhBD-2/His.于共染后第5 d,收集各组细胞的培养上清,用终点稀释分析法检测共转染效率.经过多轮感染上清反复感染Sf21细胞和终点稀释分析法验证,获得高滴度的重组病毒.(3)用特异性抗-His抗体,经Western blot检测细胞及上清hBD-2/His的表达情况.结果:经酶切鉴定和测序分析证实:C端带Myc和6个多聚组氨酸双重标志的重组hBD-2已正确地插入BEVS系统的转移载体中,构建成重组转移载体pAcGHLT-A/hBD-2/His.经过多轮感染上清反复感染Sf21细胞及终点稀释分析法验证,高滴度的重组病毒rAcNPVhBD-2/His已被获得.Western blot检测结果提示Sf21细胞已表达和分泌6xHis-GST-hBD-2-6xHis融合蛋白.结论:本研究结果支持利用BEVS杆状病毒-昆虫表达系统作为高效表达重组hBD-2生物反应器的设想.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄宁	四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室	131	466	11.0	16.0
2	王伯瑶	四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室	91	353	10.0	16.0
3	蔡绍晖	四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室	10	69	4.0	8.0