重组人β-防御素-2 基因在昆虫细胞的转染表达

• 作者: 杜军 王伯瑶 蔡绍晖 黄宁
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类β-防御素-2基因 基因重组 杆状病毒表达系统 草地夜蛾细胞
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 832-835
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3818字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2004.06.024

摘要

目的探索杆状病毒表达系统(BEVS)高效表达人β-防御素-2 (hBD-2)的可行性及其技术路线.方法利用特异性引物经 PCR 扩增,从重组质粒 rpcDNA3.1/ hBD-2/ myc-His中扩增出完整重组 hBD-2/His基因片段.将此片段插入转移质粒pAcGHLT-A的多克隆位点中,构建成重组转移载体rpAcGHLT-A/hBD-2/His.用该重组转移载体和多角体病毒AcNPV DNA共转染草地夜蛾细胞(Sf21),二者在细胞内经过同源重组形成重组病毒rAcNPV/hBD-2/His.用终点稀释分析法检测感染上清重组病毒的感染效率.采用Western 印迹法通过特异性抗-His抗体检测细胞及上清hBD-2/His的表达.结果目的基因hBD-2/His正确地插入BEVS系统的转移载体.经rpAcGHLT-A/hBD-2/His和AcNPV DNA共转染的Sf21细胞有较高滴度的重组病毒rAcNPVhBD-2/his存在.被共转染的Sf21细胞的可溶性蛋白,在相对分子质量约47.5×103处有强反应条带显示,其大小与根据测序结果所推测的hBD-2融合肽相对分子质量接近.培养上清分别在相对分子质量约40×103和30×103处有强反应条带显示.结论可利用BEVS系统作为高效表达重组hBD-2的生物反应器.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡绍晖	暨南大学药学院	63	488	11.0	19.0