9.1C3胞内抗体基因的克隆及其对9.1C3 分子表达的抑制作用

• 作者: 刘飞 夏海滨 张建平 李德敏 欧阳为明 金伯泉
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 ScFv 胞内抗体 表达载体 Jurkat细胞
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 页码范围: 58-61
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3187字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2001.01.016

摘要

目的 获得9.1C3胞内抗体基因的真核表达载体，观察胞内抗体对9.1C3分子表达的抑制作用，为进一步研究9.1C3分子对NK细胞功能的影响打下基础。方法 设计引物，以9.1C3ScFv基因为模板进行PCR扩增，引入蛋白质内质网定位所需的信号肽、KDEL以及作为表达检测标记的E-tag序列。回收纯化PCR产物，酶切后连接到pUC19载体上，并进行序列测定。序列正确后切下胞内抗体基因片段，重组到真核表达载体pRc/CMV中，酶切鉴定后用DEAE-dextran方法瞬时转染真核细胞COS7，用胞内染色和Westernblot方法检测胞内抗体的表达。接着用Lipofectamine把胞内抗体基因转入9.1C3阳性的Jurkat细胞，用FCM观察胞内抗体对9.1C3分子表达的影响。结果 DNA序列测定证明，通过PCR成功地为9.1C3ScFv引入了内质网定位所需的信号肽、KDEL及E-tag序列，成功地构建了胞内抗体真核表达载体，通过胞内染色方法和Westernblot证明胞内抗体在COS7中得到表达。转入Jurkat细胞后发现胞内抗体能下调9.1C3分子的表达水平。结论 以9.1C3ScFv基因为模板PCR扩增得到9.1C3胞内抗体基因，并构建了真核表达载体。