人CD226(PTA1)分子胞膜外区的原核表达、复性及免疫反应性的鉴定

• 作者: 宁双飞 张新海 李琦 杨琨 欧阳为明 贾卫 金伯泉 陈丽华
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD226 PTA1 原核表达 重折叠复性
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 587-590
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 4153字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2002.06.001

摘要

目的构建人CD226(PTA1)分子胞膜外区的原核表达载体,并进行原核表达和复性,为该分子的X线结晶衍射及功能学研究提供充足的蛋白来源.方法将人CD226分子的胞膜外区基因克隆人原核表达载体pBV220,测序证实后,转化宿主菌MC1061/P3并进行温度诱导表达.产物采用稀释加透析法复性,亲和层析柱纯化,并通过Western blot和ELISA对其复性效果进行鉴定.结果温度诱导7 h,目的蛋白的表达量达宿主菌总蛋白量的23.8%,其相对分子质量为30×103,Western blot及ELISA证实其重折叠和复性是成功的.结论成功地获得了人CD226(PTA1)分子胞膜外区的原核表达产物,可用于该分子X线结晶衍射及功能学实验.