小鼠耳蜗神经营养因子-3基因的克隆及其基因工程细胞模型的建立

• 作者: 杨安钢 王枫 王锦玲 许彦鸣 高下 高辉
• 来源期刊: 听力学及言语疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经营养因子-3 耳蜗 克隆 基因治疗
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 27-30
• 页数: 4页
• 分类号: R764.5
• 字数: 4247字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7299.2002.01.011

摘要

目的克隆小鼠耳蜗组织神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT3)基因,并转染该基因至体外培养的T淋巴细胞系的Jurkat细胞,建立能够表达和分泌NT3的基因工程细胞模型,为后续体内应用作准备.方法用反转录PCR方法扩增NT3基因,定向克隆入测序载体pUC19.酶切和测序鉴定正确后,再以pUC19-NT3质粒为模板,通过PCR方法得到上下游能够与pCDNA3载体中酶切位点匹配的NT3片段,进一步克隆获得pCDNA3-NT3质粒.酶切鉴定正确的质粒经阳离子脂质体包埋转染入Jurkat细胞,通过G418反复筛选后,有克隆形成再扩大培养;收集部分细胞提取其中的总RNA,反转录PCR检测有无NT3基因片段存在;并利用这些细胞的培养上清鉴定有无生物学活性.结果正确克隆的小鼠耳蜗组织NT3基因转染Jurkat细胞后,能够表达和分泌NT3蛋白并具有生物学活性,促进离体毛细胞和听觉神经元的存活.结论在体外建立表达NT3基因并分泌NT3蛋白的基因工程细胞模型是可行的,为进一步应用到体内治疗感音神经性聋奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王锦玲	第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科	139	800	14.0	20.0
2	王枫	第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科	148	773	13.0	21.0
3	杨安钢	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	147	801	14.0	21.0
4	高下	第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科	19	42	4.0	5.0
5	许彦鸣	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	26	106	5.0	9.0
6	高辉	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	21	79	6.0	7.0