防污染PCR-微孔板杂交检测布鲁氏菌方法研究

• 作者: 宋亚军 张敏丽 杨瑞馥 汪晓辉 王津 郭兆彪
• 来源期刊: 中国地方病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 布鲁氏菌 检测 微孔板杂交 防污染
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 检测方法
• 页码范围: 503-506
• 页数: 4页
• 分类号: R378.72
• 字数: 3388字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-4955.2002.06.024

摘要

目的建立防污染PCR-微孔板杂交-EIA检测技术,并用于布鲁氏菌及其模拟感染组织中细菌的检测.方法根据布鲁氏菌31 kD热休克蛋白和外膜蛋白2B(OMP2B)基因设计引物,筛选合适引物,并建立用脲嘧啶糖基化酶防污染的PCR扩增-微孔板杂交与酶联显色检测布鲁氏菌的方法,并用于模拟污染布鲁氏菌动物脏器标本的检测.结果根据布鲁氏菌31 kD热休克蛋白和外膜蛋白2B基因设计的引物,建立了复合PCR,同时检测2个基因的存在,并发现不同引物序列对PCR扩增敏感性影响较大,可以相差1 000倍.用0.5 U的UDG可以防止108产物的污染,微孔板杂交-酶联显色检测比单纯PCR-电泳敏感10倍.将该体系用于污染动物脏器的检测,可以检测出反应体系中2～200个细菌的存在.结论研究的防污染PCR-微孔板杂交-EIA试剂克服了目前PCR试剂运输不便、产物污染所致假阳性和判定结果欠客观的缺点,为布鲁氏菌的快速检测提供了一个有力手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨瑞馥	军事医学科学院微生物流行病研究所	180	1706	21.0	33.0
2	张敏丽	军事医学科学院微生物流行病研究所	38	388	12.0	18.0
3	郭兆彪	军事医学科学院微生物流行病研究所	47	474	13.0	20.0
4	王津	军事医学科学院微生物流行病研究所	30	378	11.0	18.0
5	宋亚军	军事医学科学院微生物流行病研究所	41	437	13.0	19.0
6	汪晓辉	军事医学科学院微生物流行病研究所	4	39	3.0	4.0