小球藻NADP-谷氨酸脱氢酶的cDNA克隆及转基因烟草分析

• 作者: 孟颂东 杨怀义 王荣 田波 黄国存
• 来源期刊: 植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 谷氨酸脱氢酶 转基因烟草 氮素吸收 膦化 麦黄酮抗性
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 318-324
• 页数: 7页
• 分类号: Q943.2
• 字数: 873字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-9072.2002.03.012

摘要

用RT-PCR方法从小球藻(Chlorella sorokiniana)中克隆了铵诱导表达的以辅酶Ⅱ为辅基的谷氨酸脱氢酶(NADP-GDH)基因的cDNA片段,DNA测序分析表明与已报道的该基因c DNA序列同源性为94%.将NADP-GDH基因先插入到SPDK621质粒的2CaMV35S启动子和Ω增强序列之后,然后将2CaMV35S-Ω-GDH-NOS表达单元构建到RokⅡ质粒的HindⅢ与Eco RⅠ之间,从而获得高效植物表达载体.将RokⅡ-GDH质粒转移到根癌土壤杆菌(Agro bacterium tumefaciens (Smith et Townsend) Conn) EHA105中,对烟草(Nico tiana tabacum L.)进行转化并得到阳性转化后代.对转基因烟草分析表明,在低氮培养基或在低氮蛭石中其生长速度和叶片数明显高于对照;铵毒性实验表明,无论在低铵或高铵条件下,接种在MS固化培养基上的转基因绿叶圆片存活时间长,叶绿素含量高.这些结果说明外源NADP-GDH增强了植物对氮素的吸收和利用.另外,转化后代还表现了对除草剂膦化麦黄酮(PPT)具有较强的抗性;培养在含有不同浓度PPT的MS固化培养基上的转基因绿叶圆片,其愈伤化程度明显高于对照;在MS培养基中用0.5 μg/mL 的PPT可以代替卡那霉素对转化后代进行筛选,这暗示 NADP-GDH基因可以作为一种新的选择标记用于植物基因工程的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王荣	中国科学院微生物研究所	84	1968	29.0	42.0
2	田波	中国科学院微生物研究所	70	951	16.0	29.0
3	孟颂东	中国科学院微生物研究所	23	246	6.0	15.0
4	杨怀义	中国科学院微生物研究所	22	297	9.0	17.0
5	黄国存	中国科学院微生物研究所	4	142	4.0	4.0